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目的： 1.研究siRNA、shRNA、和以pRNA为载体的siRNA所诱导的RNAi作用在抑制HBV表达和/或复制中的应用，探讨siRNA的抗病毒作用。为以RNAi为基础的HBV靶向治疗提供实验基础。 2.利用HBV急性感染小鼠模型，对RNAi的在体抗病毒效率进行评价。为进一步研究HBV在小鼠体内表达和复制、小鼠针对HBV的免疫应答情况以及抗病毒治疗后小鼠免疫功能的变化提供动物模型。 3.评价shRNA对土拨鼠肝炎病毒基因表达的抑制效果，为今后实现以RNAi为基础的抗病毒“鸡尾酒”疗法提供完备的实验依据。 方法： 1.利用分子克隆技术分别构建HBV表面蛋白和WHV表面蛋白真核表达质粒，构建针对WHV表面蛋白基因的shRNA表达质粒。 2.采用高压水注射方法，通过尾静脉将HBV感染性克隆导入BABL/cJ小鼠体内，应用ELISA、Southern Blotting、 Northern Blotting，以及免疫组化等方法，检测小鼠血清和肝组织中HBV抗原的表达、肝组织中病毒转录和复制情况以及小鼠免疫应答状况。 3.将HBV表面蛋白和WHV表面蛋白真核表达质粒与siRNA或shRNA表达质粒共转染Hela细胞，通过Western blotting检测相应嗜肝DNA病毒蛋白表达水平。 4.将HBV感染性克隆与siRNA或shRNA表达质粒以及以pRNA为载体的siRNA共转染HepG2细胞，通过ELISA和Southern blotting检测HBV基因表达和复制水平。 5.将HBV感染性克隆与shRNA表达质粒共注射BALB/cJ小鼠，应用ELISA及免疫组化等方法检测小鼠体内HBV基因表达和复制水平。 结果： 1.siRNA、shRNA和以pRNA为载体的siRNA能够在哺乳动物细胞内诱导RNAi过程。Hela细胞中HBV表面蛋白和WHV表面蛋白的表达受shRNA的抑制，抑制率达90％以上，并呈剂量依赖性。siRNA和shRNA可抑制HepG2细胞中HBV复制和基因表达，细胞上清中HBsAg和HBeAg表达抑制率分别达95％和85％，细胞内HBV复制中间体也受到一定程度的抑制。 2.shRNA抑制小鼠体内HBV基因的表达和复制，小鼠血清HBsAg在注射后第1天，表达水平相对于对照组降低70％以上，这种抑制作用持续到注射后第4天。与对照组相比，干扰组小鼠肝组织HBcAg的表达也明显减低。 结论： 1.利用HBV急性感染小鼠模型可对RNAi的在体抗病毒效率进行评价。 2.在细胞和动物水平，RNAi能特异地抑制嗜肝DNA病毒基因表达和/或复制，以pRNA为载体的siRNA能在哺乳动物细胞内诱导产生RNAi效应。 本研究的意义： 1.本研究利用不同形式的小RNA诱导RNA干扰效应，在细胞和HBV急性感染小鼠模型中较为系统的研究了RNAi对于嗜肝DNA病毒表达和复制的抑制作用，为研究RNAi的抗病毒作用提供了较为完善的实验数据，从而为进一步探索HBV感染的新的分子治疗手段提供了实验基础。 2.在国际上首次利用以pRNA为载体的siRNA，在哺乳动物细胞内诱导RNAi效应，并有效抑制了HBV在体外复制系统中的复制和基因表达，为HBV感染的靶向抗病毒治疗的研究奠定了基础。