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研究目的： 分离和纯化多发性骨髓瘤患者骨髓来源Flkl~+间充质干细胞，鉴定其生物学性状，并比较其与正常成人骨髓来源Flkl~+间充质干细胞的成骨潜能。比较转录共刺激因子TAZ在两者中表达量的不同，研究骨髓瘤细胞、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-3(IL-3)对骨髓Flkl~+间充质干细胞成骨潜能以及TAZ表达的影响，从而进一步探讨TNF-α、IL-3、以及TAZ与多发性骨髓瘤骨病之间的关系。 研究方法： 分离并纯化多发性骨髓瘤患者和正常成人骨髓来源Flkl~+间充质干细胞，观察其细胞形态，测定其生长曲线，利用流式细胞仪测定其免疫表型、细胞周期。在成骨、成脂和成血管内皮诱导培养基中体外诱导其向成骨细胞、脂肪细胞和血管内皮细胞分化，并利用RT-PCR、Von-Kossa染色法、油红O染色法以及组化等方法鉴定。体外向成骨诱导Flkl~+间充质干细胞两周，利用Real-time RT-PCR分别检测成骨诱导1周和2周时成骨指标，如碱性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)、成骨蛋白(osteopontin，OPN)、骨钙蛋白(osteocalcin，OC)、Cbfal(Core-bindingfactors)／Runx2的表达，用Von-Kossa染色法测定成骨诱导2周后钙质沉积。 利用Real-time RT-PCR和Western blot检测多发性骨髓瘤患者和正常成人骨髓来源Flkl~+间充质干细胞中TAZ的表达量。酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测骨髓瘤患者和正常人骨髓血清中TNF-α和IL-3的浓度。分别用CD138~+骨髓瘤细胞或者人骨髓瘤细胞系(HMCLs)与正常人Flkl~+间充质干细胞行Transwell成骨共培养。部分共培养体系中加入抗TNF-α或／和抗IL-3单克隆抗体。两周后Real-timeRT-PCR检测Flkl~+间充质干细胞的成骨指标碱性磷酸酶(ALP)和Cbfall以及TAZ的mRNA表达量。Von Kossa染色法鉴定钙质沉积程度。正常入骨髓Flkl~+间充质干细胞培养体系中加入TNF-α和／或IL-3，一周后Real-time RT-PCR和Western blot分别检测这些细胞TAZ的mRNA和蛋白质的表达量。 研究结果： 多发性骨髓瘤患者骨髓来源Flkl~+间充质干细胞在光镜下呈成纤维细胞样生