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该论文包含两方面的工作.第一个工作研究了金黄色葡萄球菌核酸酶SNase N-末端区域对SNase的结构、功能和折叠性的影响,第二个工作是对一种细胞凋亡相关蛋白TFAR19在原核生物中的表达、纯化以及其蛋白质结构和功能的初步研究.1.为了研究金黄色葡萄球菌核酸酶SNase N-末端区域对SNase的结构、功能和折叠性的影响,我们设计并表达纯化了两组共8个突变体,一组是从N-端开始缺失不同长度的缺失突变体,包括Δ1-6,Δ1-11,Δ1-20和Δ1-28;另一组是第一个和第二个β-转角处的Gly替换突变体,包括G20A,G20I,G20V和G29V.研究了这些突变体的远紫外和近紫外圆二色谱、内源荧光以及ANS结合荧光光谱、水解DNA的酶活性、配体pdTp结合实验、脲变性实验以及Glu-C酶切实验等.结论是,N-端序列的完整性对SNase的结构和功能是非常重要的,即使缺失的只是N-端6个在蛋白质结构上是处于无结构状态的氨基酸,也会影响SNase的功能和稳定性.进一步的缺失与其结构和功能的失去同向进行.我们还发现了Δ1-11这个缺失突变体,有较好的二级结构和活力,却基本没有三级结构,但是在配体的诱导下,又有一定的构象回复能力.2.使用金属螯和层析的方法纯化了可溶性表达于大肠杆菌中的N-端带有His<,6>-tag和一个羟胺切点(Asn↓Gly)的TFAR19蛋白,此蛋白对应的是一种发现于人体白血病细胞的细胞凋亡相关基因,分子量大约为14kD,在缺乏细胞因子的情况下,TFAR19具有促进正在凋亡的细胞加速凋亡过程的作用.在经过一个羟胺切反应以及进一步的FPLC ResourceQ柱纯化之后,得到了高纯度的TFAR19蛋白.对得到的产物进行了一系列的性质测定,包括N-端氨基酸序列测定、质谱实验、以及活力实验等.使用圆二色谱和荧光光谱对TFAR19的结构进行了初步的分析,得到了TFAR19内各种二级结构的含量.由于发现了一个与TFAR19同源性高达32％的蛋白质已经有了三级结构数据,利用这些数据采用同源建模的方法预测得到了了TFAR19的三级结构,这个结果跟圆二色谱得到的结果一致,即TFAR19是一个富含α-螺旋的蛋白质.