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论文使用凝胶层析(GFC)、SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及毛细管电泳(CE)三种方法对猪皮胶原多肽的结构进行分析研究,测定了多肽的分子量和分子量分布、分子中的氨基-羧基数量比及其等电点等结构特性。胶原多肽由猪革生产中的含铬革屑在碱性蛋白酶催化水解下得到,论文还对含铬革屑的水解进行了研究。
本文建立的含铬革屑的水解条件为:水:200.00mL;革屑:20.00g;酶:0.60mL;起始pH:11.00;反应时间:6h。凝胶层析柱填料选用SephadexG-100,测得多肽分子量主要分布在两个区间:70,000~50,000D和30,000~20,000D,平均分子量分别为58,608D和24,580D。SDS-PAGE测得多肽分子量主要分成两个蛋白条带:第一条带分子量约为70,000~50,000D,第二条带分子量约为30,000~20,000D,平均分子量分别为58,895D和22,364D;根据毛细管区带电泳理论,我们推导出多肽分子中氨基-羧基数量比的计算公式为:q1/q2=tap1/1-teo1/1/tap2/1-teo2/1×1+10pH1-pK1/1+10pK2-pH2测得猪皮胶原多肽的氨基-羧基数量的比值约为0.95:1,比理论值的1.13:1低16%,等电点约为8.00,比猪皮胶原蛋白的7.8高2.7%。
GFC、SDS-PAGE是蛋白质、多肽分子量测定的常规手段,论文借鉴其它蛋白质的测试条件,开展对猪皮胶原多肽分子量和分子量分布的分析研究,并对含铬革屑水解条件与多肽分子量的对应关系进行了初步探讨;毛细管电泳依据分子的荷质比实现组分的分离,据此,论文通过多肽的电泳速度与电渗流速度的比较,测定了其等电点,并通过多肽在等电点两侧pH值下电泳时间的差异,计算分子中的氨基-羧基比,给出了猪皮胶原多肽电荷特性、侧链官能团数量等分子精细结构信息。论文研究结果将为蛋白质、多肽等两性分子的深层结构分析研究提供理论指导和新的实验方法,研究具有开拓性。论文研究结果对皮胶原蛋白的资源化利用具有重要意义。