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寡孢节丛孢(Arthrobotrysoligospora)是研究捕食性线虫真菌的模式生物,它既能够作为腐生真菌生长,也能通过形成捕器—三维菌网捕捉线虫而营寄生生活。该菌对线虫的侵染包括以下生物学过程:首先是形成三维菌网捕捉线虫,菌丝黏附于线虫的体表;接着菌丝分泌胞外酶降解线虫的体壁,并穿透线虫的体壁。 目前,影响三维菌网形成的基因还鲜有报道。本文以寡孢节丛孢(A.oligosporaFres)ATCC24927菌株为研究对象,研究了丝氨酸蛋白酶Kexinfamily基因kex2在菌丝生长发育、捕食器官形态建成、以及对线虫侵染中的作用。结果发现,敲除菌株△Aokex2生长受到抑制,主要表现为生长缓慢、整体菌落表型发生变化并且不形成孢子。敲除kex2后,线虫不能诱导寡孢节丛孢形成完整的捕器。侵染实验表明杀线虫活性降低。由于kexin蛋白与蛋白质分泌有关,我们研究了kex2敲除后对寡孢节丛孢蛋白分泌谱的影响。结果发现,敲除菌株△Aokex2胞外蛋白质种类减少。我们以前研究报道,在寡孢节丛孢侵染线虫时,癌胚抗原相关细胞粘附因子基因NF表达上调。所以本课题还研究了NF在寡孢节丛孢侵染中的作用。结果发现,敲除菌株△Aonf,生长没变化,孢子产量降低,但孢子萌发率升高。有趣的是,敲除型菌株△Aonf经过线虫诱导后,捕器增加并且对线虫的侵染捕食能力升高。 综上所述,本论文发现了kex2基因影响寡孢节丛孢捕器形成和毒力,这可能与kex2抑制寡孢节丛孢蛋白分泌有关。另外,我们发现了一个对寡孢节丛孢捕器形成和毒力负调控的基因NF。NF敲除菌株可以作为一个潜在的杀线虫的工程菌候选菌株。