棉花GhMAPK4L基因的表达及功能研究

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蛋白激酶可以催化蛋白的磷酸化作用,而且大多在其S/T的残基上发生。促分裂原激活蛋白激酶(MAPK)在植物对胁迫应答上占有非常重要作用,MAPKKK、MAPKK和MAPK构成了MAPK的三级级联途径,这3种激酶通过磷酸化作用依次激活其下游。  ABA(脱落酸)作为植物中一种重要的逆境激素和信号分子参与了植物对外界环境的逆境胁迫应答过程,H2O2作为植物响应逆境胁迫应答时的一个重要的信号分子能够激活一些MAPK。大量研究表明,MAPK介导ABA对胁迫的调控,且占有重要地位,同时ABA也能诱导H2O2的合成。本研究将一个可以编码MAPK的蛋白基因从棉花的cDNA文库中克隆出来,分析其序列及结构后命名其为GhMAPK4L,并从它的表达及功能方向着手进行了分析研究,取得的主要结果如下:  1.GhMAPK4L基因的蛋白质序列分析将一个编码MAPK蛋白的基因从棉花的cDNA文库中分离出来,对这个基因的cDNA序列进行分析,该基因全长为1697bp,含有1098bp的ORF,编码365个氨基酸,相对分子质量为42.378kD,等电点为6.277,对该基因的序列进行分析得知,GhMAPK4L与B类MAPK蛋白相似性较高,该基因与烟草NaMAPK4同源性分别为90%,与拟南芥AtMAPK4同源性达88%,与油菜BnMAPK4同源性为88%,且它们处于同一个进化分支上,因此命名为GhMAPK4L。  2.GhMAPK4L基因在棉花中的表达分析对棉花不同组织的cDNAs进行Real Time-PCR,在根中的表达量最高,其次是下胚轴、花药和十天纤维,在子叶中的表达量是最低的。胁迫处理后的棉花的CDNA,进行RT-PCR分析,结果显示,经胁迫处理后,GhMAPK4L的表达量均有所上升。RT-PCR分析表明,在棉花幼苗中,该基因能够被ABA、盐和干旱诱导。  3.GhMAPK4L转基因拟南芥的表性分析为了研究GhMAPK4L基因的功能,我们将GhMAPK4L基因转入野生型拟南芥,获得转基因植株。过量表达GhMAPK4L的拟南芥进行表型分析的结果表明,拟南芥中过量表达GhMAPK4L能够增强拟南芥对ABA、盐和干旱的敏感性。这些结果表明:GhMAPK4L可能参与植物的胁迫应答。
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