视黄醇结合蛋白4在子痫前期患者血清和胎盘中的表达及意义

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背景:子痫前期(Preeclampsia PE)是妊娠20周后发生的一种以高血压,蛋白尿为主要特征的妊娠特有疾病,该疾病及其导致的相关并发症是孕产妇和围产儿死亡的重要原因之一。由于发病机制不清,尚无有效的治疗方法。近年来,随着分子生物学的快速发展以及人类基因组计划的顺利完成,生命科学已跨入了后基因组时代,对人类生命现象的研究重心已逐步从“结构”层面过度向“功能”层面。而这一转化的标志就是蛋白质组学的兴起。临床蛋白质组学的主要目的是在不同生理情况下,通过比较正常和疾病情况下的蛋白质组学资料,来鉴定该疾病的生物标志物,发现致病蛋白,从而达到早期诊断且针对病因的治疗的目的。  目的:通过蛋白质组学技术寻找子痫前期患者血清差异蛋白。后期筛选出可能与子痫前期发病相关的蛋白进行验证并探讨该蛋白是否具备成为子痫前期生物标志物的前景及在子痫前期发病过程中的作用机制。方法:本课题通过PLLB处理10例子痫前期患者及10例正常妊娠妇女血清,富集血清中低丰度蛋白,后进行1D胶联合LC-MS/MS分析。筛选出表达有显著差异的蛋白。后期对10例子痫前期患者及10正常妊娠妇女血清进行Western blot验证。对69例子痫前期患者及30例正常妊娠妇女血清中RBP4浓度进行ELISA测定。对子痫前期患者及正常妊娠妇女胎盘进行免疫组化观察RBP4在胎盘中的表达。最后对胎盘组织中RBP4mRNA的表达通过real-time PCR进行测定。  结果:蛋白质组学:子痫前期与正常妊娠相比共有58种表达明显差异的蛋白,其中上调蛋白35种,下调蛋白23种。Westernblot测定RBP4灰度值结果:子痫前期患者及正常妊娠妇女血清相比PEvsControl:2366.98±33.19SDVS4905.32±78.47SD,P<0.05;ELISA测定子痫前期患者血清及正常妊娠患者血清中RBP4浓度:子痫前期患者RBP4均值66.0ng/mL,四分位差42.0-77.2ng/mLvs正常妊娠妇女RBP4均值99.3ng/mL,四分位差43.1-266.8ng/mL,p=0.015;免疫组化结果:子痫前期患者及正常妊娠妇女胎盘中均有RBP4的表达,正常妊娠胎盘VS子痫前期患者胎盘细胞密度:4363.54±380.31VS3012.65±625.28,正常妊娠胎盘VS子痫前期胎盘光密度:0.63±0.37VS0.38VS0.05,且差异有统计学意义。Real-time PCR结果:子痫前期患者胎盘中RBP4mRNA表达明显低于正常妊娠妇女,且差异有统计学意义。  结论:蛋白质组学是一种有效的寻找疾病生物标志物的技术。RBP4在子痫前期患者中表达下调,有望成为预测子痫前期发生的生物标志物值得深入探索。
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