白氏文昌鱼IKK基因的克隆及其免疫功能分析

• 作 者: 周璐
• 出 处: 南京师范大学
• 发表日期: 2013年01期
• 关键词: 文昌鱼 IκB激酶 NF-κB LPS 适应性免疫

形态学以及分子生物学的证据表明文昌鱼是脊索动物中的基底生物,是研究脊椎动物形态、发育以及免疫系统的起源与进化的重要模式生物。随着比较免疫学的迅速发展,以及佛罗里达文昌鱼基因组测序的完成,关于文昌鱼免疫的研究越来越引起人们的关注。因此,本研究在文昌鱼EST数据库的基础上,利用分子生物学方法初步研究了文昌鱼IKK基因在LPS刺激后的免疫应答方面的机制,同时结合进化分析了文昌鱼IKK基因在进化中的地位,本论文主要的研究成果如下：(1)利用RACE对白氏文昌鱼的AmphiIKK基因进行克隆,结果表明AmphiIKK基因的cDNA序列全长3087bp,其中ORF包含2334bp,预计编码777aa,5’UTR包含164bp,3’UTR包含589bp。(2)经过初步分析表明,AmphiIKK的理论分子量为89.3kDa,等电点为6.26；AmphiIKK与之前发现的IKK蛋白之间存在着43.8%-64.0%的相似性,23.6%-43.3%的一致性。AmphiIKK蛋白具有哺乳动物IKK蛋白一样,具有一个保守的丝氨酸/苏氨酸激酶结构域,在这个结构域中,含有一个丝氨酸/苏氨酸激酶活化位点和一个保守的MAPKK活化茎环。与人类的IKα和IKKβ比较,文昌鱼IKK蛋白同样具有一个潜在的HLH基序,一个LZ结构,和NBD结构。AmphiIKK蛋白的空间三级结构与其他7个物种的IKK蛋白均相同,均折叠成“手枪”状。系统发育分析表明,AmphiIKK间于无脊椎动物和脊椎动物之间,和合浦珠母贝、太平洋牡蛎等无脊椎动物更为接近。(3)实时定量检测表明IKK基因在所有检测的组织中均表达,其中在肌肉、鳃和脊索中表达最为丰富。在LPS刺激后,AmphiIKK在6h有1.46倍的表达量,在8h时有1.80倍的表达量,在12h后趋于平常,表明在外源LPS刺激后文昌鱼IKK基因表现出上调趋势。