旋毛虫肌幼虫排泄分泌抗原单克隆抗体的制备及鉴定

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目的 利用杂交瘤技术建立分泌抗旋毛虫肌幼虫排泄分泌(ES)抗原单克隆抗体(McAb)杂交瘤细胞株,并对其及分泌的McAb进行鉴定。 方法 用旋毛虫肌幼虫ES抗原免疫BALB/C小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤SP2/0细胞融合,筛选分泌高滴度McAb杂交瘤细胞株,制备腹水进行纯化。采用ELISA间接法、央心法、竞争法分别测定培养细胞上清液及腹水中McAb滴度、相对亲和力和相加效应,琼脂双扩散试验鉴定免疫球蛋白类型,检测McAb与日本血吸虫成虫抗原、虫卵抗原、弓形虫RH株速殖子抗原、猪囊虫囊液抗原、包虫囊液抗原、旋毛虫成虫表皮抗原、成虫可溶性抗原、成虫ES抗原、肌幼虫可溶性抗原、肌幼虫48hES抗原、肌幼虫72hES抗原的交叉反应。电镜观察杂交瘤细胞超微结构,计数染色体数目及观察杂交瘤细胞分泌McAb的稳定性。 结果 筛选出2株分泌高滴度抗旋毛虫肌幼虫ES抗原McAb杂交瘤细胞株。电镜显示:杂交瘤细胞具有肿瘤细胞和浆细胞的特征,胞浆内可见大量分泌颗粒;杂交瘤细胞染色体数目平均为98.6条:2株杂交瘤细胞均能稳定分泌McAb;2株McAb均属IgM类,B2C12株培养上清液和腹水McAb滴度分 天津医科大学硕士学位论文别为l:1280和l:2.O48xlod,EllFll株为1:640和l.024x10‘,其中前者较后者的相对亲和力高;2株McAb识别ES抗原不同的抗原决定簇;McAb与日本血吸虫成虫抗原、虫卵抗原、弓形虫RH株速殖子抗原、猪囊虫囊液抗原、包虫囊液抗原、旋毛虫成虫表皮抗原、成虫可溶性抗原、成虫ES抗原、肌幼虫可溶性抗原、肌幼虫48hES抗原、肌幼虫72hES抗原均不发生交叉反应。至吉士仑 获得2株抗旋毛虫肌幼虫ES抗原杂交瘤细胞株,均能稳定分泌敏感性强、特异性高的IgM类McAb,并可识别不同的抗原决定簇,·为进一步建立检测旋毛虫循环抗原(CAg)、早期诊断旋毛虫病诊断试剂盒和制备基因工程抗体准备了理想的试验材料。
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