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目的：1.通过利用MTT法对课题组筛选出的11种中医药单体进行抗恶性黑素瘤筛查，结合三种不同类型的恶性黑素瘤细胞的生物学行为改变，明确一个具有突出效果的目标单体。2.通过对目标单体紫草素，进行细胞增殖、迁移、侵袭以及该些过程中相关基因表达的检测，深入探讨了紫草素对恶性黑素瘤上述生物学行为改变的抑制。 方法：1.以A375、B16-F10、Sk-Mel-31，3种不同类型的黑色素瘤细胞为研究目标，利用MTT法对11种中药单体进行抗肿瘤研究，浓度分别为：1.0×10-5mol/L和1.0×10-6mol/L。2.以A375、B16-F10、Sk-Mel-31，3种不同类型的恶性黑色素瘤细胞为研究目标，利用MTT法对知母皂苷AⅢ、紫草素、汉防己甲素、汉防己乙素4种中药单体进行12h、24h、48h抗肿瘤研究比较，以便筛出最中目标单体，浓度分别为：1.0×10-5mol/L和1.0×10-6mol/L。3.利用MTT法对所选出的中药单体紫草素在A375及Sk-Mel-31肿瘤细胞中，进行IC50的测定并绘制生长抑制曲线。4.以A375、B16-F10两种不同类型的恶性黑素瘤细胞为研究目标，进一步过表达BRAF或BRAF-V600E后，观察紫草素对细胞的抑制作用。5.以B16-F10、Sk-Mel-31两种不同类型的恶性黑素瘤细胞为研究目标，利用划痕实验及Transwell侵袭实验，判断紫草素对黑素瘤迁移及侵袭能力的影响。6.在B16-F10、Sk-Mel-31中过表达BRAF或BRAF-V600E基因，通过Western blot实验，检测紫草素BRAF、c-myc、skp2等增殖转移相关基因表达的影响。 结果：1.MTT结果显示：发现仅有紫草素、汉防己甲素、汉防己乙素、知母皂苷AⅢ，四种单体在1.0×10-5mol/L的浓度下时对三种细胞的抑制作用较强，其余药物中，土贝母皂苷甲（1.0×10-5mol/L）仅对A375细胞中具有抑制作用，冬凌草甲素（1.0×10-5mol/L）仅在Sk-Mel-31细胞中效果较佳，而在其余两种细胞中作用却不甚明显。2.四种药物均对恶性黑素瘤细胞有一定抑制作用，且该作用具有时间和剂量依赖效应。在高浓度下，四种中药单体均对这三种恶性黑素瘤细胞表现出强大的抑制作用；然低浓度下，四种单体的抑制作用明显减弱。然与其于三种药物单体相较，紫草素在低浓度作用于三种细胞中最大抑制率亦属四单药之首，且由于知母皂苷AⅢ、汉防己甲乙素有多方面的储存需求，固紫草素相对药效稳定，更利于实验的进行。因此，紫草素将作为下一阶段的目标药物。3.MTT法测得24h后紫草素于两种细胞中的IC50值分别为3.749×10-6mol/L(于Sk-Mel-31细胞中)、2.004×10-6mol/L(于A375细胞中)。且在6×10-6mol/L浓度下随着时间的延长，紫草素的作用逐渐加强。4.紫草素在细胞增殖方面对BRAF及BRAF-V600E有一定的抑制作用，且尤其对于BRAF-V600E突变过表达组的抑制较强。5.紫草素在2.0×10-6mol/L的浓度下处理4h，经24h的培养后对两种细胞的迁移及侵袭运动均影响较大。与对照组的对比，实验组迁移率明显由90%降低至50%左右；相同条件下的侵袭实验中，实验组的侵袭数目亦由明显低于对照组。5.Myc和Skp2的表达均在BRAFV600E组高于BRAF组，且在这两组中紫草素的处理作用可体现出较好的抑制作用。 结论：目标单体紫草素在体外对恶性黑素瘤无论是增殖、迁移、侵袭等多个方面都有明确的抑制作用，同时它还可以影响与之相关的信号因子包括BRAF、c-myc、skp2蛋白表达，阻止恶性黑素瘤的增殖和发展。