论文部分内容阅读
1.在M16、CZB培养液的基础上,通过添加或去除葡萄糖、NaH<,2>PO<,4>、牛磺酸、EDTA等成分制成了7种不同的小鼠胚胎体外培养液,用它们对小鼠1-cell胚胎进行培养试验,培养结果显示:1.葡萄糖、磷酸盐成分对小鼠早期胚胎发育有一定的毒害作用,使胚胎发育突破2-cell阻滞的比率大大降低.但是,一旦突破2-cell阻滞,含葡萄糖的培养液反而更有利于胚胎的发育.2.牛磺酸对小鼠早期胚胎发育有很好的促进作用,添加到培养液后使各阶段发育率均大大提高.3.单独添加EDTA对小鼠早期胚胎发育没有任何促进作用,但是可以协同牛磺酸促进胚胎发育.4.改良的小鼠体外培养液mM16+E+T、mCZB+T都能很好的支持小鼠早期胚胎体外发育,均可作为ICR小鼠体细胞核移植重构胚体外培养液.2.7％的乙醇处理5~10min为最佳乙醇激活方案,以其为激活方法进行最佳激活卵龄的研究,结果表明:卵龄在18~23小时内激活率差异不显著,但成下降趋势,为了满足核移植程序中延迟激活的需要,选择21小时卵龄作为最佳的激活卵龄.对21小时卵龄卵母细胞进行电激活研究显示:80v/mm、100v/mm、120v/mm脉冲电压处理间无显著差异,100v/mm处理激活效率最高;随着脉冲宽度延长,激活率呈上升趋势,80μs时激活率达到最高.比较Sr<2+>处理、乙醇处理、电激活3种激活方式对21小时卵龄卵母细胞的激活效率,结果显示3种激活方式的激活效率均较高,彼此间无显著差异.Sr<2+>处理相对效率较高,且操作简单,因此可以作为核移植重构胚的激活方式.3.采用直接去核法、透明带切割法、PMM法3种目前最常用的核移植方法对小鼠进行体细胞核移植的研究.3种方法都未对卵母细胞核进行示踪,仅以第一极体作为参照进行去核,都属于盲吸法范畴,在去核率上没有显著差异.直接去核法对卵母细胞造成较大的伤害,去核操作过程中极易使卵母细胞膜破裂、发生崩解;透明带切割法分步操作使操作变的柔和,对卵母细胞的刺激减小,去核卵母细胞的存活率较高;PMM法靠脉冲电压在透明带上打孔进行辅助去核,脉冲参数稍大或压透明带太紧都极易在击破透明带的同时击破卵膜,使卵母细胞发生崩解.在构建重构胚的过程中,胞质内注射法较电融合法而言,程序简单,带入的供体胞质较少,构建重构胚的效率更高.