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禽流感（Avian Influenza,AI）是由禽流感病毒（Avian Influenza Virus,AIV）引起的一种禽类急性传染病。自1997年至今,不仅屡次造成各国禽业的巨大损失,而且频频突破种间屏障,致使全球有近200人感染,100多人死亡。随着不断研究发现,水禽不仅已成为禽流感病毒高度易感禽类,而且是禽流感病毒的巨大贮存库和重要传染源。目前,我国防控HPAI的有效途径是注射油乳剂灭活疫苗。但该疫苗仍有诸多缺陷。一是免疫后机体形成有效抗体滴度的间隙期较长,不能满足紧急情况下快速建立免疫保护的要求;二是油佐剂刺激性大、难吸收,在肉鸭宰杀销售之时仍有部分油佐剂残留于机体,严重影响产品质量。因此,寻求油佐剂替代佐剂,填补现行禽流感灭活油苗的缺陷已成为迫切需要。随着纳米技术的广泛应用,已有研究显示无机纳米铝佐剂可能最具曙光。但是纳米氢氧化铝佐剂辅佐的禽流感疫苗对肉鸭的特异性免疫、非特异性免疫、免疫器官发育和粘膜免疫等方面效果的影响还未见报道。针对以上问题,本课题用纳米氢氧化铝佐剂物理吸附禽流感H5N1灭活抗原,制作了纳米Al（OH）3辅佐AI H5N1灭活疫苗,并以肉鸭为实验动物,旨在研究:①纳米Al（OH）3辅佐AI H5N1灭活疫苗对肉鸭特异性免疫的影响;②纳米Al（OH）3辅佐AI H5N1灭活疫苗对肉鸭非特异性免疫的影响;③纳米Al（OH）3辅佐AI H5N1灭活疫苗对肉鸭免疫器官的影响;④纳米Al（OH）3辅佐AI H5N1灭活疫苗对肉鸭黏膜免疫的影响。本研究将为纳米Al（OH）3辅佐AI H5N1灭活疫苗在肉禽养殖中的实际应用提供理论依据,同时为肉鸭的禽流感防治工作提供理论参考。本研究分为以下几部分:1.纳米Al（OH）3辅佐AI H5N1灭活疫苗对肉鸭特异性免疫的影响研究将108只雏鸭随机分入4组,各组受试鸭腿部肌肉注射免疫物0.5ml/只。免疫后第3、5、7、10、14、21、28、35天按血凝抑制（HI）试验方法检测其AIV抗体滴度。免疫后第7天,第21天,第35天,测定E玫瑰花环形成率和淋巴细胞增殖活性。结果显示:纳米铝佐剂疫苗能显著提高机体抗体应答的速度,产生有效保护抗体时间较油佐剂疫苗和常规铝佐剂疫苗提前3天和7天,抗体峰值达到时间较油佐剂疫苗提前14天,但抗体持续时间不如油苗持久;在玫瑰花环形成率和淋巴细胞增殖试验中,纳米铝佐剂组与其他三组没有显著差异（P＞0.05）。结果表明:纳米氢氧化铝作为H5N1亚型禽流感疫苗的免疫佐剂,可以更早的刺激动物产生有效保护抗体,并在肉鸭的早期生长阶段,对细胞免疫具有一定的刺激作用,但并不能激发肉鸭明显的细胞免疫。2.纳米Al（OH）3辅佐AI H5N1灭活疫苗对肉鸭非特异性免疫的影响研究将68只雏鸭随机分入4组。在免疫后第7天,第21天,第35天,进行碳廓清试验和溶菌酶含量测定。结果显示:免疫后第7天,纳米组的碳廓清指数相对较高,与常规铝组相比差异显著（P＜0.05）:免疫后第21天和第35天,纳米组碳廓清指数与其他三组差异不显著（P＞0.05）。免疫后第7天,纳米组的溶菌酶含量较高,与油乳剂组、常规铝组和生理盐水组均差异显著（P＜0.05）;免疫后第21天和第35天,纳米组碳廓清指数与其他三组差异不显著（P＞0.05）。结果表明:在肉鸭生长的早期阶段,纳米铝佐剂禽流感疫苗对肉鸭血清中溶菌酶含量和巨噬细胞的吞噬能力都有一定的提高作用,说明纳米氢氧化铝作为H5N1亚型禽流感疫苗的免疫佐剂,可以提高早期肉鸭巨噬细胞的活性,增强非特异性免疫的能力。3.纳米Al（OH）3辅佐AI H5N1灭活疫苗对肉鸭免疫器官的影响研究将68只雏鸭随机分入4组。免疫后第7天,第21天,第35天,将鸭称重后处死,接着取出胸腺、脾脏和法氏囊称重,计算脏/体比值。结果显示:免疫后第7天,法氏囊指数相对于油乳剂组、常规铝佐剂组和生理盐水组差异显著（P＜0.05）。胸腺指数和脾脏指数相对于其他三组差异不显著（P＞0.05）。免疫后第21天和第35天,三种免疫器官的指数均差异不差异（P＞0.05）。结果表明:纳米疫苗在一定程度上能促进肉鸭免疫器官的发育特别是法氏囊的发育从而在一定程度上增强肉鸭的免疫力。4.纳米Al（OH）3辅佐AI H5N1灭活疫苗对肉鸭粘膜免疫系统的影响研究将75只雏鸭随机分入3组。至14日龄各组受试鸭鼻腔接种免疫物0.5ml/只。免疫后第7、14、21、28、35天,按照血凝（HA）和血凝抑制（HI）试验技术对不同时期的粘液样品进行AIV抗体滴度抗体的检测。结果显示:免疫后第7天,纳米组抗体水平极显著高于灭活抗原组和对照组（P＜0.01）;免疫后第14天,纳米组和灭活抗原组的抗体效价分别达到高峰值,纳米组抗体水平极显著高于灭活抗原组和对照组（P＜0.01）。结果表明:鼻腔途径接种纳米Al（OH）3辅佐AI H5N1灭活疫苗能够诱导肉鸭产生一定的黏膜免疫反应,有效加强家禽局部免疫力。