论文部分内容阅读
杂色鲍（Haliotis diversicolor）是我国南方的养殖鲍种，具有重要的经济价值。研究与杂色鲍生长相关的基因及其表达规律，并筛查与生长性状相关联的SNP位点，对于深入了解生长性状调控的分子机制，培育具有优良性状的新品种具有重要意义。鲍鱼是植食性软体动物，以海藻为主要的食物和能量来源，而鲍鱼消化液中比较突出的多糖降解酶是褐藻胶裂解酶、纤维素酶、甘露聚糖酶β-1，3-葡聚糖酶和淀粉酶。因此本研究将褐藻胶裂解酶、纤维素酶和淀粉酶的三个基因作为杂色鲍生长性状相关的候选基因，通过基因克隆、饵料对酶活影响、高通量测序SNP位点检测及与生长性状的关联分析，筛选出与生长性状显著关联的SNP位点，以期为选择育种提供重要依据。主要结果如下: 1、利用PCR及末端快速扩增技术(RACE)技术以及基因步移技术(GenomeWalking)克隆获得三个基因的cDNA全长、DNA全长及上游序列，其中淀粉酶只获得了部分内含子。褐藻胶裂解酶cDNA序列全长927bp，无内含子，开放阅读框(ORF)长720bp，上游序列5052bp;纤维素酶基因cDNA序列全长1962bp，开放阅读框长1782bp， DNA全长5649bp，含9个外显子和8个内含子，上游序列长度为719bp;杂色鲍amylase的cDNA序列全长2195bp，开放阅读框长2097bp，DNA部分全长4302bp，含4个外显子和3个内含子，上游序列长度为2340bp。 2、通过qRT-PCR检测了三个基因在杂色鲍幼体8个时期和成体7个不同组织的表达量，发现三个基因表达模式相似，都是在幼体的匍匐前期开始表达，在成体中具有组织特异性，肝胰腺中表达量较高。 3、通过饲喂四种不同饵料:紫菜、海带、配合饲料和龙须菜对杂色鲍体内三种酶活力的比较，发现褐藻胶裂解酶和纤维素酶四种不同饵料之间差异不明显，组内的雌雄差异大于组间差异。杂色鲍淀粉酶发现存在α-淀粉酶和β-淀粉酶，β-淀粉酶活力高于α-淀粉酶。总淀粉酶变化和β-淀粉酶变化趋势相同，在饲喂配合饲料后活力最高，龙须菜最低，组间差异明显。 4、通过高通量测序，在褐藻胶裂解酶基因中找到84个SNP位点，与生长性状关联之后发现存在两个相关性显著的位点ALG1016和ALG1544，其中，与壳长显著相关的是ALG1544(P＜0.05);与壳宽显著相关的是ALG1016(P＜0.05)，极显著相关的是ALG1544(P＜0.001);与壳高极显著相关的是ALG1016(P＜0.01);与全重显著相关的有ALG1016和ALG1544(P＜0.05)。