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非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease，NAFLD)是由肝脏脂质代谢紊乱引起的慢性肝脏疾病，表现为肝脏过量脂质堆积。随着人们生活水平的提高和饮食结构的改变，不良饮食等习惯引起的NAFLD疾病发病率不断上升，已成为全世界的重大公共卫生问题。此外，NAFLD还是代谢综合征的重要组成部分，NAFLD与肥胖、高血压、糖尿病及其他心脑血管疾病密切相关，对人类健康构成严重威胁。因此，针对NAFLD的预防和治疗已引起广泛关注。二十碳五烯酸(eicosapntemacnioc acid， EPA)和磷脂酰胆碱(phosphatidylcholine，PC)等活性物质均对NAFLD具有缓解作用，市场产品较为成熟，但结合两种活性成分优点的磷脂型二十碳五烯酸则较为罕见，目前仅有欧美国家生产的南极磷虾油，占据高端保健品市场。海参是一种我国传统的滋补品和海洋药材，海参磷脂型二十碳五烯酸(eicosapntemacnioc acid-enrichedphosphatidylcholine from sea cucumber，EPA-PC)是由海参体壁中提取的新型活性物质，是一种在Sn-2位富含EPA的PC类化合。研究证明EPA-PC具有EPA和PC的双重活性，已有研究显示其具有减肥、降血糖、调节脂质代谢等功效，但对于EPA-PC对NAFLD的干预作用尚未见报道。因此，为探究EPA-PC这一新型活性物质对NAFLD的作用效果，经过初步筛选，本实验以冰岛刺参(Cusumariafrondosa)为原料，提取纯化海参EPA-PC，采用1%乳清酸饮食诱导建立大鼠NAFLD模型，研究了海参EPA-PC对NAFLD脂质代谢的调节作用，并从脂肪酸、甘油三酯和胆固醇代谢三个方面对其作用机制进行了系统探讨。主要研究结果如下：1.经EPA-PC干预3w后，模型大鼠血清TG和TC水平显著降低，HDLC水平显著上升；肝脏TC和TG含量显著下降，磷脂含量无明显变化；血清和肝脏中多不饱和脂肪酸比例显著上升，肝脏中去不饱和指数显著下降，n-6/n-3不饱和脂肪酸比值显著下降；粪便总脂质和TC含量明显增加，胆汁酸排泄量显著降低。提示EPA-PC可显著降低NAFLD大鼠血清和肝脏脂质水平，改善血清和肝脏脂肪酸组成，促进粪便脂质的排泄。2.脂肪酸代谢是肝脏中甘油三酯代谢的基础，本实验从脂肪酸合成和β-氧化两方面研究了EPA-PC改善脂肪酸代谢的分子作用机制。RT-PCR检测结果显示，EPA-PC可显著下调转录因子SREBP-1c的mRNA的表达量，并进一步下调ACC1、FAS、SCD1、ME、G6PDH等与脂肪酸合成相关的下游基因转录；EPA-PC还可以通过显著上调PPAR-α这一关键调控因子的表达，上调CPT-1、ACOX等脂肪酸分解相关基因的mRNA的表达量，促进主要脂肪酸转运载体FAT的转录。酶活力检测结果显示，EPA-PC可显著抑制FAS、ME和G6PDH等脂肪酸合成过程中的关键限速酶活力；提高CPT-1和ACOX等脂肪酸β-氧化分解的关键限速酶活力。以上结果表明，EPA-PC通过抑制脂肪酸合成，促进脂肪酸β-氧化分解，有效改善脂肪肝大鼠的脂肪酸代谢。3.甘油三酯代谢直接影响NAFLD中肝脏的脂肪蓄积水平，本实验从甘油三酯合成和分解两方面研究了EPA-PC改善甘油三酯代谢的分子作用机制。RT-PCR检测结果显示，EPA-PC可显著抑制大鼠肝脏中GPAT、DGAT等甘油三酯合成相关基因的转录，上调甘油三酯分解关键酶ATGL的mRNA表达，下调甘油二酯分解关键酶HSL的mRNA表达。以上结果表明，EPA-PC通过抑制甘油三酯合成，促进甘油三酯分解，有效缓解脂肪肝大鼠的甘油三酯堆积。4.肝脏胆固醇蓄积是NAFLD的另一主要症状，本实验从胆固醇合成、转化和分泌排泄三方面研究了EPA-PC改善胆固醇代谢的分子作用机制。RT-PCR检测结果显示，EPA-PC可显著抑制模型大鼠肝脏胆固醇合成关键酶HMGR的转录，下调胆固醇转化胆汁酸关键酶CYP7A的mRNA表达水平，提高胆固醇转运排出关键载体SCP2的转录水平。以上结果表明，EPA-PC主要通过抑制大鼠肝脏中内源性胆固醇合成、促进胆固醇向胆汁中分泌排出，来降低肝脏胆固醇水平，促进胆固醇代谢平衡。5. AMPK是感应和调控体内能量代谢的总开关，对SREBP-1c、PPAR-α等脂质代谢关键转录因子均有调控作用，LKB1和CAMKK是AMPK的上游激酶。本实验结果表明，EPA-PC能够通过刺激LKB1和CAMKK的转录来促进AMPK的mRNA表达，提示EPA-PC可通过激活AMPK的转录对NAFLD脂质代谢进行综合调节。综上所述，EPA-PC能抑制肝脏中脂肪酸、甘油三酯和胆固醇的合成，促进三者的分解和分泌排出，改善模型大鼠肝脏中的脂质堆积症状。机制研究表明，EPA-PC通过促进AMPK的mRNA表达，来抑制SREBP-1c的转录，并上调PPAR-α的mRNA表达量，进一步调控脂肪酸、甘油三酯和胆固醇代谢关键酶的表达，进而改善大鼠肝脏脂质代谢。本实验研究结果为EPA-PC在功能性食品和方面的开发利用，打破欧美国家对磷脂型EPA高端保健产品的垄断，提供了理论依据。