论文部分内容阅读
目的:探讨脑出血(intracerebral hemorrhage,简称ICH)模型大鼠急性期血肿周围脑组织炎性反应的变化规律及不同频率电针对炎性反应的影响。方法:3月龄Sprague-Dawley(简称SD)雄性大鼠136只,按随机数字表法随机分为空白对照组(简称空白组)8只,假手术组32只,ICH模型组(简称模型组)32只,ICH+电针低频组(简称低频组)32只,ICH+电针高频组(简称高频组)32只。后4组再随机分6小时(hour,h)组、24h组、72h组和7天(day,d)组各8只。模型采用脑立体定位仪向SD大鼠右侧脑尾状核注入0.6U(0.2U/μl)胶原酶Ⅶ建立脑出血模型;假手术组向脑内注入3μl的生理盐水;空白组不手术。空白组、假手术组与模型组均不予治疗;针刺取大鼠大椎、风府、水沟穴,针刺后大椎与风府二穴接华佗牌电针仪,电针低频组采用频率2赫兹(hertz,Hz),波宽0.175毫秒(millisecond,ms),电流强度为1毫安(milliampere,mA)、电压1伏(volt,V)的电针参数;电针高频组采用频率100Hz,波宽0.175ms,电流强度为1mA、电压1V的电针参数,每次电针刺激30分钟(minute,min),每日1次。运用行为学、免疫组化学及病理学等方法,观察脑出血大鼠的神经功能缺损评分(neurological deficit score,NDS)、白介素(Interleuldn,IL)-1β、IL-6、IL-10在不同时点的变化规律及不同频率电针对以上指标的影响。结果:1.不同频率电针均能够改善ICH模型大鼠神经功能实验发现,模型组6h即出现神经功能缺损,48h达到高峰,持续至72h,1w时开始恢复。电针低频组与高频组神经功能缺损的变化趋势与模型组相同,但两个针刺组神经功能评分从48h开始恢复,7d时恢复至正常。与模型组比较,电针低频组与高频组在48h、72h时的神经功能缺损显著低于模型组相应时间点(P＜0.05或0.01)。而两个电针组之间比较,各时间点神经功能缺损评分无显著性差异(P均＞0.05)。即两个电针组的神经功能缺损较模型组轻,且恢复较模型组早。病死率方面,模型组死亡10只,电针低频组死亡4只,电针高频组死亡6只,且死亡多发生在48h内。模型组病死率为31.25%,电针低频组为12.50%,电针高频组为18.75%。采用x~2检验发现,低频组、高频组与模型组三组的病死率无显著性差异(P＞0.05)。2.ICH模型大鼠脑组织病理形态学改变光镜下可见模型组6h弥漫出血,神经细胞损伤严重,组织溶解;24h血肿红细胞溶解,血肿周围可见大量的肿胀细胞,细胞外和血管周围水肿突出。血肿边缘可见大量成团的中性粒细胞浸润,脓肿形成;72h血肿中心区可见红细胞开始吸收,周围水肿仍明显存在,小胶质细胞增生,中性粒细胞弥漫浸润;7d血肿明显吸收,水肿较前明显消退,细胞肿胀减轻,呈以淋巴细胞为主的慢性炎症及纤维结缔组织增生。3.不同频率电针对ICH模型大鼠细胞因子的影响3.1不同频率电针均能够抑制ICH模型大鼠炎性细胞因子IL-1β和IL-6的表达免疫组化显示:空白组有少量的淡黄色IL-1β和IL-6阳性神经细胞表达。模型组6h血肿周围组织见黄色淡染的IL-1β阳性神经细胞,24h达到高峰,可见黄褐色深染的IL-1β阳性神经细胞,7d时减少。模型组6h血肿周围见少量黄色淡染的IL-6阳性神经细胞,24h血肿周围组织出现黄色深染的IL-6阳性神经细胞,高峰持续至72h,7d时减少。统计学结果显示,模型组IL-1β从6h开始有显著表达,24h达到高峰,72h开始回落,7d时降至正常。组内比较显示,7d时IL-1β阳性神经细胞表达较6h、24h、72h的表达显著下降(P均＜0.01)。IL-6阳性神经细胞的表达在模型组6h开始增加,24h达到高峰,持续至72h,7d时下降,但仍高于正常。组内比较显示,模型组24h、72h IL-6阳性神经细胞表达显著高于6h时的表达,7d时的表达显著低于24h的表达(P均＜0.01)。电针低频组与高频组IL-1β阳性神经细胞的表达趋势与模型组相同,模型组所有时间点、电针低频组和高频组6h、24h、72h时的IL-1β阳性神经细胞表达均显著高于空白组(P＜0.05或0.01)。电针低频组6h、72h和高频组72h时IL-1β阳性神经细胞的表达与模型组相应时间点比较均有显著性差异(P均＜0.05),其余时间点无显著性差异(P＞0.05),电针低频组和高频组IL-1β阳性神经细胞各个时间点比较无显著性差异(P均＞0.05)。电针低频组与高频组IL-6阳性神经细胞的变化趋势与模型组相同,但在72h时即回落,与正常组比较无差异(P＞0.05)。组间比较显示,模型组所有时间点、低频组和高频组6h、24h IL-6阳性神经细胞表达均较空白组显著增高(P＜0.01或0.05)。模型组24h、72h、7d组,低频组24h、72h,及高频组24h IL-6阳性神经细胞的表达均高于假手术组相应时间点的表达(P＜0.01或0.05)。低频组和高频组在72h、7d时的IL-6表达显著低于模型组相应时间点(P均＜0.01)。电针低频组和高频组IL-6阳性神经细胞各个时间点比较无显著性差异(P均＞0.05)。3.2不同频率电针均能够增加ICH模型大鼠抗炎因子IL-10的表达