论文部分内容阅读
本文针对抗生素VS产生菌Streptomyces SN03进行高产菌株的选育工作，以高产菌株的发酵液为试材，研究了发酵液的性质，探索了活性组分的分离工艺，获得抗生素纯品，并研究了抗生素VS对植物病毒病的防效。结果如下：
1．采用自然选育结合诱变育种的紫外线诱变和微波诱变的方法，对抗生素VS产生菌Streptomyces SN03进行了改良。在紫外线照射120s后，分离获得优势菌株StreptomycesSN03-2-UV-1，抑菌圈直径达到29.8mm。以．Streptomycesr SN03-2-UV-1作为微波诱变的出发菌株；微波处理时间为50s时，获得高效稳定菌株．Streptomyces SN03-2-UV-1-W3，大大提高了原始菌株．Streptomyces SN03发酵液的活性，使抑菌圈直径由原来的25.5mm增大至33.2mm，活性最大提高率高达30.20％，远远超出单独使用紫外线或微波诱变时的活性最大提高率，菌株传代10代后，仍能保持很高的抑菌活性，具有很稳定的遗传性状。
2．对抗生素VS发酵液进行初步研究，表明发酵液对酸、碱、热、光均具有良好的稳定性，高剂量紫外线照射对活性有影响，但在实际应用时自然光中的紫外线强度远远达不到试验中的紫外线剂量，所以在应用中紫外线的影响可以忽略。pH纸层析试验表明，发酵液在酸性条件下，能够出现2个或3个抑菌圈，在碱性条件下Rf值又逐渐上升，说明抗生素VS为多组分化学物，其活性组分在酸性条件下能被分离开，与标准纸层析图谱比对，判断抗生素VS的组分或组分之一为碱性：捷克Doskochilova的八种溶剂系统纸层析试验表明活性组分为极性物质，溶于水。
3．对抗生素VS的分离提纯技术进行比较，最终确定其提纯工艺为：发酵液离心过滤，获得的上清液用草酸调酸至pH2～pH3，在50℃～60℃水浴中保温2h，过滤后减压浓缩：浓缩液上样于Diaion HP20大孔吸附树脂，用25％～75％乙醇以0.25mL/min的速度梯度洗脱，分管收集洗脱液，进行活性测定，对活性组分分别进行紫外扫描，收集活性组分，减压浓缩；浓缩液点样于硅胶GF254薄板上，在甲醇：水(4：1)的展层剂中上行展层，收集活性带，用无离子水浸提24h，过滤，上清液冷冻干燥，再用少量无离子溶解；溶解后上样于Sephadex LH-20凝胶柱，用25％～70％的甲醇溶液进行梯度洗脱，分管收集洗脱液，进行活性测定，分别对活性组分进行紫外扫描，收集峰形一致的组分：冷冻干燥脱去水份，得到白色粉末状抗生素VS纯品。
4．研究抗生素VS的理化性质。抗生素VS的纯品为白色粉末状，易溶于水，微溶于甲醇，不溶于乙醇、丙酮、正丁醇、乙酸乙酯、正己烷、苯、氯仿、四氯化碳、吡啶等有机溶剂。抗生素VS纯品有很强的耐冷、耐热性。高剂量紫外线对活性略有影响。
官能团反应试验表明抗生素VS的结构中可能含有糖或糖苷键，可能为氨基酸、多肽或蛋白质结构，不含有还原糖、不饱和烯基、醛基、酚基等基团。
5．通过对抗生素VS的紫外光谱扫描，活性组分水溶液在209nm处有一吸收峰，在0.1 mol/L HCl溶液中208rlm处有一吸收峰，二者的最大吸收波长相近，但是峰形有差别，而在0.1mol/L的NaOH溶液中吸收峰后移至224nm。推断抗生素VS中含有芳香环。对活性组分进行核磁测定，用D<,2>O进行交换，脉冲序列压制水峰，测定2D NOESY，结果在8.5～8.0ppm处有信号峰，说明提取物中含有酰铵键，为蛋白或多肽；在4.5～3.0ppm之间有较强信号峰，表明提取物中含有糖；在其他位置处的信号峰显示提取物中含无机组分。核磁共振的结果与官能团试验的结果一致。经过分析，该样品为多肽或小蛋白质分子，暂命名为抗病毒抗生素VS，但确切结构尚需进一步研究。
6．研究了抗生素VS对植物病毒病的防治作用。结果表明，抗生素VS对TMV、CMV、PVY等植物上常见的病毒均有很好的防治效果。研究抗生素VS对心叶烟上TMV的影响，调查枯斑抑制率，最高可达96.72％；在普通烟上，抗生素VS对TMV的防治效果可高达61.64％。在黄瓜和烟草上，抗生素VS对CMV的防治效果分别为70.52％和55.18％；在普通烟K326上研究抗生素VS对PVY的防治效果，在体外钝化处理时防治效果最好，可达72.73％。
抗生素VS是一种广谱的新型肽类抗病毒抗生素，对多种植物病毒有很好的防治作用，有很好的稳定性和耐储藏性，可以进一步进行研究并产业化，使之称为新型的生物农药。