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本文分析了不同产地杜仲叶营养及药用活性成分含量,建立了基于高效液相色谱技术(HPLC)的可以对杜仲叶相关产品进行质量控制的方法,同时优化了杜仲叶中主活性成分绿原酸的提取工艺,探索了以绿原酸为主成分的杜仲叶提取物对高血脂症的预防作用。
杜仲叶中总糖、总磷、总蛋白、粗纤维、粗脂肪、灰分以及金属离子含量的测定方法分别为葸酮比色法,钼酸盐分光光度法,GBTl4771-1993,GBT5009.10-2003,GBT14772-1993,GBT8306-87GB和火焰原子吸收法,绿原酸、总黄酮含量的测定采用文献方法,营养成分的测定结果表明杜仲叶中基本营养元素齐全,重金属含量低,绿原酸、黄酮类物质含量较为丰富。
杜仲叶指纹图谱的研究采用HPLC法,对不同产地的杜仲叶药材进行了指纹图谱研究。色谱条件为:ZORBAXSB-C18(150mm×4.6mm,5μm)色谱柱,流动相为0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B),采用梯度洗脱,0min-10min(5%-10%B),10min-50min(10%-40%B),50min-55min(40%-50%B),55min-60min(50%-50%B),进样量10μl,流速为1ml/min,检测波长210nm,柱温室温。本研究建立的色谱条件重现性好,精密度高,方法稳定,可以用于杜仲叶药材的真伪鉴别和杜仲叶产品的质量控制。
在单因素分析的基础上进行正交实验优化杜仲叶中绿原酸的提取工艺,确定杜仲叶中绿原酸的最佳提取条件为:以70%乙醇为提取溶剂,料液比1:16,在90℃下回流提取1.5h,杜仲叶绿原酸提取率可达4%。
在上述实验基础上考察以绿原酸为主成份的杜仲叶提取物对小鼠高脂血症的预防作用,以高脂乳剂灌胃的方法建立小鼠高脂血症模型,设空白组、模型组、阳性对照组、杜仲给药组、绿原酸组和芦丁组,实验期间,监测各组小鼠实验期间体重的变化,并观察各组小鼠血清总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)及高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)变化趋势,小鼠处死以后做肝脏H&E切片,观察肝细胞状态。研究结果表明,该提取物具有良好的调节血脂的作用,绿原酸与芦丁均具有很好的调脂作用,其中杜仲叶提取物对小鼠肝脏伤害较小。本研究目的和意义在于探索杜仲叶的资源利用新途径,为充分利用我国丰富的杜仲叶资源提供基础数据支持。