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炎症是一种生活中很常见的机体应对外界刺激的防御反应,炎症部位会出现红、肿、热、痛的症状,其中炎症性皮肤病还伴有瘙痒反应。无论疼痛还者瘙痒都是令人不愉快的生理感觉,严重时会影响患者的工作和生活质量。但临床上常用的非甾体抗炎药物主要包括阿司匹林、对乙酰氨基酚等,或多或少具有不同的副作用,如胃肠道副反应以及对肝肾功能的损害等。于是研究者将目光转向了天然产物——芦荟、龙胆、山药等的提取物均已被证实对急慢性炎症有着良好的治疗效果,但其中的具体抗炎成分和机制尚未清楚。本文选取山药这种药食同源的植物,分离提取其中的抗炎活性成分并探究相应抗炎机制。这是首次从肥大细胞的角度探究芦荟大黄素的抗炎作用,可以为临床防治ACD和用芦荟大黄素治疗ACD提供新的思路。目的:应用柱色谱法、中压制备色谱法对山药进行分离纯化,主要聚焦其中的抗炎活性成分再运用动物行为学及免疫组化等技术探究各个化合物的活性作用和抗炎机制。实验方法:利用中空纤维过滤系统粗分山药提取物,将其分为小分子部分(<10KD)和大分子部分(>10KD)。对于小分子部分主要采用的是硅胶柱色谱法、C-18柱色谱法、反相中压制备色谱法、高效液相色谱法、超高效液相色谱法等进行分离纯化,再利用质谱、核磁共振等技术进行结构鉴定。对于大分子部分,主要用蛋白纯化仪离子交换层析分离大分子蛋白,用钙离子成像技术进行活性的追踪检测。用2%漆酚诱导变应性接触性皮炎,应用动物行为学实验验证芦荟大黄素的抗炎止痒效果;应用苏木精-伊红染色观察皮肤厚度,探究芦荟大黄素的抗炎效果;应用甲苯胺蓝染色观察芦荟大黄素对炎症模型小鼠背部皮肤中肥大细胞数目、肥大细胞脱颗粒比例的影响。实验结果:1.山药小分子部分分离纯化,并进行结构鉴定,最终得到六种化合物,分别是芦荟大黄素、山药素Ⅰ、黄芪紫檀烷、刺芒柄花素、2,7-dihydroxy-4,6-dimethoxyphenanthrene、2,2’,7,7’-Tetrahydroxy-4,4’,6,6’-tetramethoxy-1,1’-biphenanthrenes。2.山药大分子部分经过离子交换层析得到的三个色谱峰中峰1和峰3具有细胞活性。3.芦荟大黄素通过抑制肥大细胞脱颗粒缓解2%漆酚诱导的急慢性变应性接触性皮炎。芦荟大黄素可以减少模型组小鼠抓挠次数,缓解瘙痒;降低模型组小鼠皮肤厚度;并减少肥大细胞浸润,降低肥大细胞脱颗粒比例,改善炎症。实验结论:目前分离得到的山药中抗炎活性成分有以上六种,其中芦荟大黄素可以通过抑制肥大细胞脱颗粒、缓解2%漆酚诱导的急慢性变应性接触性皮炎。