【摘 要】
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目的:免疫组化技术以其操作简便、敏感性高、特异性强等优点广泛应用于基础医学的研究及临床疾病的诊断,其应用使病理学诊断达到了一个新的高度。但是,免疫组化在实际应用中
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目的:免疫组化技术以其操作简便、敏感性高、特异性强等优点广泛应用于基础医学的研究及临床疾病的诊断,其应用使病理学诊断达到了一个新的高度。但是,免疫组化在实际应用中存在许多问题,为此,科研人员做了大量实验,发现许多因素可以影响免疫组化染色结果,如组织固定、抗原修复、内源性抗生物素蛋白结合物、抗体质量,其中二抗的质量对染色结果很重要。本实验用小鼠抗兔白蛋白抗体(单抗或多抗)做免疫原或亲和原、来制备二抗,目的是探讨并提出一种新的制备二抗的方法。将本室分离的菌株所产的链霉亲和素(SA)用辣根过氧化物酶(HRP)标记,制备HRP-SA。方法:1 利用细胞融合杂交瘤技术,成功地制备了12株、能分泌小鼠抗兔白蛋白单抗的杂交瘤细胞,经冻存后有8 株细胞仍能存活并稳定分泌单抗,将这8 株细胞分别制备腹水后,先用间接ELISA 法检测腹水中单抗的亚类和效价,再用亲和层析法纯化单抗。2 将兔白蛋白偶联于Sepharose 4B 亲和层析柱上用于纯化单抗,纯化过程中收集洗脱液并浓缩,先通过琼脂双相扩散法和分光光度计检测蛋白浓度,再用免疫电泳法鉴定单抗的纯度,最后将单抗作为抗原偶联到4B 柱上,用于纯化抗抗体(即:山羊抗小鼠IgG)。3 用兔白蛋白免疫昆明小鼠,制备了小鼠抗兔白蛋白抗血
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