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动脉粥样硬化过程是大血管及中血管的一种慢性炎症,大量研究表明,在心血管病患者血清中氧化型低密度脂蛋白(oxidized low-density lipoprotein, oxLDL)水平会升高,而且升高的程度与疾病的严重程度相关。许多研究证实oxLDL不仅仅是动脉粥样硬化的危险因子和发生冠状动脉事件的预测因子,而且在动脉粥样硬化的发生和发展中起着比低密度脂蛋白(Low density lipoprotein, LDL)更重要的作用。但是其在促进动脉粥样硬化的发展进程中机制尚未完全清楚。泡沫细胞的形成是在动脉粥样硬化发生过程中早期的关键环节,其初始环节为血管内皮损伤。本研究旨在探讨oxLDL刺激下泡沫细胞形成过程中uPAR(urokinase-type plasminogen activator receptor)及LOX-1 (Lectin like oxidized low density lipoprotein receptor-1)表达的影响。研究目的探讨不同时间点不同浓度oxLDL对正常人外周血单个核细胞uPAR、LOX-1蛋白的表达情况的影响。方法1.选取THP-1细胞系,用含20%胎牛血清的RPMI1640完全培养基培养,经PMA (phorbol 12-myristate 13-acetate)处理之后,细胞巨噬化,CD68免疫组化染色鉴定巨噬细胞。2.选取正常人外周血经Ficoll密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞(PBMC),用含20%自体血清的RPMI1640完全培养基培养。3. Western Blot方法检测不同浓度oxLDL对正常人单个核巨噬细胞干预24h,72h的uPAR、LOX-1的蛋白表达。4.统计分析：western blot以TotalLab Quant软件进行积分光密度值分析。采用SPSS13.0软件进行统计分析,计量资料以Mean±SE表示,组间比较以one-way ANOVA进行分析,两组比较采用t检验,P<0.05则有统计学意义。结果1.1) Western检测发现,经oxLDL干预24小时,随着oxLDL浓度的增加,uPAR及LOX-1的蛋白表达呈上升趋势；当oxLDL为10μg/ml、20μg/ml、50μg/ml刺激PBMC后uPAR及LOX-1蛋白表达水平较空白对照组显著升高(P<0.05),且3个浓度组间的表达有显著差异；50μg/ml的oxLDL对uPAR及LOX-1表达刺激最为明显,相对于其他浓度组亦有明显的促进作用(P<0.05); 2) oxLDL浓度为100μg/ml时,对uPAR和LOX-1蛋白表达呈抑制趋势,有显著统计学差异(P <0.05); 3)polyi组对LOX-1蛋白表达有着较明显的抑制作用(P<0.05),对uPAR的表达则未见抑制作用。2.经oxLDL干预72小时,当oxLDL为20μg/ml、50μg/ml、100ug/ml刺激PBMC后uPAR蛋白表达水平较空白对照组显著升高(P<0.05),且3个浓度组间的表达有显著差异；100μg/ml的oxLDL对uPAR表达刺激最为明显,相对于其他浓度组亦有明显的促进作用(P<0.05); 2)oxLDL浓度为10μg/ml、20ug/ml时,对LOX-1蛋白表达呈上升趋势,有显著统计学差异(P<0.05); 3) polyi组对uPAR和LOX-1蛋白表达均有着较明显的抑制作用(P<0.05)。结论1. oxLDL干预正常人单个核细胞24小时后,随着其浓度的增加uPAR及LOX-1蛋白表达上调,在50ug/ml时达峰,而高浓度组(100ug/ml)对两者的蛋白表达起着抑制作用。Polyi抑制LOX-1的表达,对uPAR则没有抑制作用。2. oxLDL刺激正常人单个核细胞72小时后,低浓度(10、20ug/ml)不能有效地增加uPAR的表达,较高浓度(50、100ug/ml)能够较有效地增加uPAR的表达。3. oxLDL刺激正常人单个核细胞72小时后,LOX-1的表达随着浓度的增加而上调,但浓度≥50ug/ml时,其表达有所下降。4.本研究中oxLDL不同作用时间对机体影响不同,72小时较24小时更能显现出损伤的作用。