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猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻都是由病毒引起猪的消化道传染病，密切接触后感染性较强。该病临床症状有呕吐、严重腹泻、脱水等，以引发初生仔猪高死亡率为特征。据兽医防疫部门统计，这两种疾病在猪的各种传染病中，尤其是低龄仔猪中发病率、死亡率均较高，为影响养猪业健康发展的主要传染病之一。目前针对这两种疾病还没有有效的治疗药物，本试验旨在开发防治TGE和PED的卵黄抗体，研究该卵黄抗体提取纯化工艺，期望为这两种疾病的防治和该卵黄抗体的规模化生产提供理论依据和技术支持。本试验为制备猪传染性胃肠炎和猪流行性腹泻病毒卵黄抗体所用的免疫原为猪流行性腹泻病毒、猪传染性胃肠炎病毒二联灭活疫苗。免疫方案中设定两个剂量不同的试验组和一个对照组，按照一定的程序免疫鸡群，刺激机体产生抗TGE和PED的卵黄抗体。采用猪传染性胃肠炎病毒ELISA试剂盒和猪流行性腹泻病毒IgY抗体PPA-ELISA检测试剂盒，检测鸡群血清抗体和卵黄抗体效价变化趋势；建立并检测PED和TGE抗体共同作用的间接ELISA方法，建立的方法中采用上述疫苗为包被原，兔抗鸡-HPR为酶标二抗，经方阵滴定法确定包被原和二抗的最佳工作浓度；卵黄抗体的提取工艺的研究中，采用水稀释辛酸法、超滤法、硫酸铵盐析法的联合方法作为规模化提取纯化卵黄抗体的工艺，并确定联合法的最佳工艺参数，试验结果如下：试验中采用TGE和PED二联灭活疫苗为免疫原，免疫蛋鸡，收集高免蛋并处理，结果获得了卵黄抗体浓度、卵黄抗体效价变化趋势、血清抗体效价的变化趋势以及两种抗体共同作用的效价变化趋势。卵黄抗体在首免后一周内逐渐产生，抗体效价波动性小，两种病毒卵黄抗体效价（OD450值）最高达2.900左右，强化免疫后高效价卵黄抗体可维持4周以上；卵黄抗体浓度变化幅度小，整个检测过程中生产的卵黄抗体浓度最高时可达9.50mg/mL；血清中两种抗体共同作用效价最高达到5500。设定的两个剂量试验组中，血清中抗体和卵黄抗体在两组中均不存在显著性差异(P>0.05)，各试验组和对照组差异极显著(P<0.01)；确定的免疫程序为，胸部肌内注射免疫原，基础免疫剂量为1.0mL，随后每间隔两周进行一次常规免疫，剂量分别为1.0mL，第二次和第三次常规免疫剂量均为1.5mL，四周后进行强化免疫，剂量为1.0mL，对照组同期均注射同等剂量生理盐水。建立检测TGE和PED抗体共同作用的间接ELISA方法，确定包被原、酶标二抗最佳工作浓度分别为400倍和7000倍稀释，通过敏感性、特异性、重复性试验确定建立的间接ELISA方法具有可行性。试验中确定的水稀释辛酸法、超滤法、硫酸铵盐析法联合提取卵黄抗体的各参数条件和过程为：一份卵黄液中加入9倍4℃蒸馏水、1%辛酸后充分搅拌均匀并于4℃静置12h，4℃、12000rpm离心25min，获得的上清液调节pH为7.5，温度为25℃，采用50kDa膜包，在0.025MPa压力下进行超滤，获得浓缩液再调节pH为7.0，加入等体积PBS缓冲液后，分别加入50%、33%的饱和硫酸铵进一步的纯化，获得的提取液用PBS进行稀释即为高纯度的卵黄提取物。由紫外分光光度计测定卵黄抗体提取物的浓度，结果为9.89mg/mL，IgY提取率约90%；由SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测定卵黄抗体纯度，结果随着提纯步骤的增多，抗体纯度也越来越高，最后获得的IgY纯度约95%；由试剂盒测定抗体活性，结果抗体的效价为2.700左右。以上说明该提取方法获得的卵黄抗体含量多、纯度高、特异性强，适合大规模生产卵黄抗体的要求。