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目的:本研究采用逆转录聚合酶链反应(reverse transcriptionpolymerase chain reaction,RT-PCR)、免疫组织化学(Immunohistochemistry,IHC)技术检测甲状腺乳头状癌、甲状腺腺瘤及痛旁正常甲状腺组织中甘露聚糖结合凝集素(Mannan-binding lectin,MBL)和甘露糖结合凝集素相关的丝氨酸蛋白酶-2(MBL-assiociated serine protease-2,MASP-2)的表达,用酶联免疫吸附(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)技术检测上述患者及健康对照者的MBL和MASP-2的血清水平。获得MBL及MASP-2在不同类型甲状腺肿瘤组织中的表达规律及临床意义,从而为临床上甲状腺肿瘤的诊断、治疗及预后提供理论指导。
标本:本研究收集的组织标本为天津肿瘤医院和唐山工人医院、唐山人民医院2008-2009年手术切除的新鲜甲状腺组织,经病理科经验医师证实为甲状腺乳头状癌26例(男性8例,女性18例,年龄26-57岁)及其癌旁2cm以远正常组织26例,甲状腺腺瘤30例(男性12例,女性18例,年龄25-70岁),迅速置入液氮罐中,转移至.70℃冰箱;保存备用。上述所有研究对象和选取的26例健康献血者(男性14例,女性12例,年龄18-63岁)作为对照组均于清晨抽取空腹静脉血,EDTA2K2抗凝血2ml,分离血清后-70℃冻存待测。每例均有详细的临床资料,全部病例术前均无化疗、放疗及免疫治疗史。按照国际抗癌协会联盟(UICC)的TNM分期:I期12例,Ⅱ期8例,Ⅲ期4例,Ⅳ期2例;伴淋巴结转移6例,无淋巴结转移20例。
方法:
1.免疫组织化学(IHC)EnvisionTM二步法检测甲状腺乳头状癌26例、甲状腺腺瘤30例、甲状腺乳头状癌旁2cm以远正常甲状腺组织26例中MBL和MASP-2蛋白的表达,并结合临床资料进行比较分析。
2.逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测MBL及MASP-2在56例甲状腺新鲜予术标本(甲状腺乳头状癌26例、甲状腺腺瘤30例、甲状腺乳头状癌旁2cm以远正常甲状腺组织26例)中的表达,并结合临床资料进行比较分析;
3.用酶联免疫吸附测定(ELISA)法测定26例甲状腺乳头状癌、30例甲状腺腺瘤及26位健康志愿者作为对照组的MBL和MASP-2的血清水平,试剂盒由上海沪峰生物公司提供,操作步骤按试剂说明书进行。酶标仪450nm波长测定OD值。结合临床资料进行比较分析。
结果:
1.IHC方法检测结果:MBL和MASP-2均在甲状腺肿瘤组织的细胞胞浆中表达,MASP-2在正常甲状腺组织无阳性表达;棕色或棕褐色颗粒代表阳性表达。MBL蛋白在甲状腺乳头状癌旁正常组织中的表达水平为(0.113±0.003),在甲状腺腺瘤中的表达水平为(0.227±0.003),在甲状腺乳头状癌中的表达水平为(0.322±0.008),三者之间差异有统计学意义,MASP-2在甲状腺腺瘤中的表达水平为(0.221±0.030),在甲状腺乳头状癌中的表达水平为(0.332±0.046),甲状腺乳头状癌与腺瘤之间差异有统计学意义(P＜0.01)。MBL和MASP.2在甲状腺癌的表达与性别、年龄、病理分期、有无淋巴结转移无明显相关性(P＞0.05)。癌2.MBLmRNA在正常甲状腺组织中的表达水平为(0.1711±0.0119),在甲状腺腺瘤中为(0.3969±0.015),在甲状腺乳头状痛中的表达水平为(0.5145±0.032);甲状腺乳头状癌与腺瘤及正常甲状腺组织之间差异有统计学意义(P＜0.01),腺瘤与正常甲状腺组织之间的比较亦有统计学意义(P＜0.05):MBL在甲状腺癌的表达与性别、年龄、病理分期、有无淋巴结转移无明显相关性(P＞0.05)。
3.MASP-2mRNA在正常甲状腺组织中无MASP-2表达;在甲状腺腺瘤中的表达水平为(0.359±0.038),在甲状腺乳头状癌中的表达水平为(0.454±0.068),甲状腺乳头状癌和甲状腺腺瘤两者之间差异比较有统计学意义(P＜0.01),MASP-2在甲状腺癌的表达与性别、年龄、病理分期、有无淋巴结转移无明显相关性(P＞0.05)。
4.MBL血清的含量:甲状腺乳头状痛忠者MBL的血清含量为(565.23±76.7)ug/L,甲状腺腺瘤患者血清MBL的含量为(324.267±24.74)ug/L,健康对照者血清MBL的含量为(152.69±16.95)ug/L,甲状腺乳头状癌患者MBL血清含量高于甲状腺腺瘤患者、健康对照组,差异有统计学意义(p＜0.05),甲状腺腺瘤患者与健康对照组差异无统计学意义(P
5.MASP-2血清含量:甲状腺乳头状癌患者MASP-2的血清含量为(726.153±78.88)ug/L,甲状腺腺瘤患者MASP-2的血清含量为(379.266±30.26)ug/L,健康对照者MASP-2的血清含量为(203.846±29.09)ug/L,甲状腺癌患者MBL血清含量高于甲状腺腺瘤患者、健康对照组,差异有统计学意义(p＜0.05),甲状腺腺瘤患者与健康对照组差异无统计学意义(p＞0.05)。
结论:
1.MBL在正常甲状腺组织、甲状腺腺瘤及甲状腺乳头状癌中的表达呈递增趋势;与性别、年龄、病理分期、颈淋巴结有无转移无明显相关性。说明MBL作为免疫防御分子,可能参与了其与甲状腺肿瘤的免疫防御过程。
2.MASP-2在正常甲状腺组织中无表达,在甲状腺乳头甲状腺中的表达高于甲状腺腺瘤;与性别、年龄、肿瘤大小、颈淋巴结有无转移无明显相关性。说明MASP-2在甲状腺肿瘤的发生过程中起了作用。