【摘 要】
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在大肠杆菌中,DNA分子是从环状染色体上唯一的复制原点oriC开始沿着两个方向复制,直到终点结束。整个复制过程是被严格调控的,因此在细胞的每个世代中染色体复制且只复制一次
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在大肠杆菌中,DNA分子是从环状染色体上唯一的复制原点oriC开始沿着两个方向复制,直到终点结束。整个复制过程是被严格调控的,因此在细胞的每个世代中染色体复制且只复制一次。将带有LacZ启动子的dnaA基因构建到pUC19中,得到重组质粒pUCA12。利用限制性内切酶SmaI和SacI对亚克隆载体pUCA12进行双酶切,将得到的Lac-dnaA片断插入到带有染色体oriC的微染色体pALO22中,得到重组微染色体pDnaA。利用IPTG对微染色体pALO22和pDnaA分别进行诱导,经过Westernblotting和Southernblotting分析发现随着诱导时间的增加,DnaA蛋白的表达量在逐渐增加,微染色体pDnaA的拷贝数也逐渐增加,当pDnaA的拷贝数增加到微染色体pALO22拷贝数的4倍时,达到最大值。研究结果表明DnaA蛋白并不是调控oriC引发的DNA复制起始活动的唯一限制性因子。
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