非生物胁迫对白藜芦醇的诱导及其水溶性产品制备

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本文以白藜芦醇为研究对象,利用植物的抗逆性原理,用几种非生物胁迫的方法对新鲜虎杖根进行处理,考察其对于新鲜虎杖根状茎中白藜芦醇含量的影响。再通过单因素和正交实验对虎杖根状茎中白藜芦醇的闪式提取方法进行优化。同时,为改善白藜芦醇在水中溶解性差的缺点,以二氧化硅气凝胶为载体,制备了白藜芦醇固体分散体,提高其在水溶性介质中的溶出速率;另外,用胺甲基化的方法对白藜芦醇进行衍生化,提高其在水中的溶解度,并对其功能性质进行研究。研究结果如下:  用紫外照射和水杨酸、乙烯利、H2O2溶液对新鲜虎杖根状茎进行处理,探究其对新鲜虎杖根状茎中白藜芦醇含量的影响。结果发现,当紫外辐射时间为15 min,黑暗处理24 h后,虎杖根状茎中白藜芦醇的含量达到最大值,较辐射前提高了72%。10 mmol/L水杨酸溶液浸泡24 h后虎杖根状茎中的白藜芦醇含量提升到原来的4倍多。5% H2O2溶液浸泡24 h后虎杖根状茎中白藜芦醇含量上升了34%。而乙烯利溶液浸泡则会降低白藜芦醇的含量。  采用闪式提取法从虎杖根状茎中提取白藜芦醇,在单因素实验的基础上进行正交实验探究最佳提取工艺条件,HPLC对白藜芦醇进行定性定量分析。最后得到的闪式提取法提取虎杖根状茎中白藜芦醇的最佳工艺条件是:提取温度50℃,提取时间60 s,乙醇浓度80%,料液比例1∶30 g/mL,在此条件下,白藜芦醇得率为0.1877%。  以二氧化硅气凝胶为载体,制备白藜芦醇固体分散体。经条件优化得到最佳制备条件为:以乙醇为溶剂,25 nm粒径二氧化硅气凝胶为载体,磁力搅拌时间4h,搅拌速度400 rpm·min-1。用场发射电子显微镜、红外光谱、DSC和XRD对固体分散体进行表征,发现固体分散体中白藜芦醇的结晶程度明显减小。在体外溶出度的测定中,当溶出时间为125min时,白藜芦醇的溶出度为38.11%,而质量比为1∶1、1∶3、1∶5、1∶7的白藜芦醇固体分散体的溶出度分别为69.50%、75.77%、90.54%、92.02%。故白藜芦醇固体分散体的溶出速度要明显大于白藜芦醇本身,且随着载体比重的增加,固体分散体中白藜芦醇的溶出速度和最终的溶出度均呈上升趋势。这一结论也在大鼠灌胃白藜芦醇固体分散体的实验中得到证实。  以L-脯氨酸、甲醛为原料将白藜芦醇进行胺甲基化,提高白藜芦醇在水中的溶解度。然后将白藜芦醇与其胺甲基化衍生物的抗氧化性、酪氨酸酶活性抑制能力、α-葡萄糖苷酶活性抑制能力以及对细胞的增殖抑制能力进行对比。最后得出结论:白藜芦醇在经过胺甲基化后,其抗氧化能力与白藜芦醇类似。并且由于其水溶性的提高,其对磷酸盐缓冲液条件下的酪氨酸酶和α-葡萄糖苷酶的抑制能力有所提高。当胺甲基化白藜芦醇的质量浓度为6.6 mg/mL时,其对酪氨酸酶的抑制率为80.97%。当胺甲基化白藜芦醇浓度为6.53 mg/mL时,其对α-葡萄糖苷酶抑制率为78.25%。细胞增殖抑制实验结果表明,胺甲基化前后的白藜芦醇,对HepG-2细胞和Hela细胞均有明显的增殖抑制效果,而对正常细胞的抑制率则低于癌细胞。表明二者在抗癌防癌方面有一定的研究意义。
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