纤维素酶的纯化及固定化研究

• 作 者: 左红梅
• 机 构: 沈阳农业大学
• 出 处: 沈阳农业大学
• 发表日期: 2005年期
• 关键词: 绿色木霉 纤维素酶 戊二醛 壳聚糖 稻草粉

　　纤维素酶是降解纤维素的一组酶的总称，是起协同作用的多组份酶系，从被发现起就受到世界各国生物界的重视。现在纤维素酶应用已扩展到医药、纺织、日用化工、造纸、食品发酵、工业洗涤、烟草、石油开采、废水处理及饲料等各个领域。
　　本文从两方面系统的对纤维素酶的利用做了实验研究。一方面是作为工具酶，经逐步分离纯化，除去杂蛋白及色素，用于植物细胞原生质体制备方面的科学研究；另一方面是用粗提的纤维素酶固定化后，改善酶稳定性，用于降解纤维素。
　　以绿色木霉为材料，经稻草粉固体发酵、浸提得纤维素酶粗酶液，经硫酸铵分级沉淀，超滤，SephadexG-75柱层析三种方法逐步纯化，然后，利用逐步得到的纤维素酶，经聚丙烯酰胺凝胶电泳，检测酶的纯度变化，分别制备幼嫩番茄叶片的原生质体。结果发现：高度纯化的纤维素酶几乎得不到原生质体，而经超滤后的纤维素酶制备原生质体效果最佳。
　　自制纤维素酶粗酶液，然后，以市购壳聚糖为原料，用戊二醛作交联剂，将纤维素酶固定于壳聚糖上，测得蛋白质的固定化率为89％，CMC酶结合效率为48％，同时探讨了一定量的壳聚糖载体与交联剂浓度、给酶量等关系的最适固定化酶条件，并对固定化酶的热稳定性、操作稳定性、米氏常数、最适温度、离子强度的影响等理化性质进行了探讨。
　　最后，将固定化的纤维素酶对经酸碱不同预处理处理后的稻草粉进行降解，找到适于纤维素酶降解的预处理条件。然后确定了固定化纤维素酶处理稻草粉最佳降解条件。即酶/底物的最适比率、最适温度、最适pH值等。