EGCG对高氧诱导支气管肺发育不良的预防作用

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【目的】  1.了解高氧对新生幼鼠肺组织TNF-α、IL-2、MPO表达水平的影响。  2.观察EGCG对高氧损伤新生幼鼠肺组织TNF-α、IL-2、MPO表达水平的影响及对肺泡组织发育的影响。  3.探究EGCG预防支气管肺发育不良的效果,为临床防治BPD提供新的方案。  【方法】  1.怀孕17d的BALB/c昆明小鼠孕鼠15只,饲养在普通实验动物房,适应环境后分笼待产,观察并记录孕鼠的分娩数量和分娩时间。  2.选择分娩时间间隔小于12h的新生幼鼠测量体重,选择体重在1.8g~2.7g的幼鼠进行系统编号,其中6窝孕鼠分娩的66只乳鼠符合实验要求。  3.按窝别随机分为3组:A正常组:小鼠在室内环境喂养;B:EGCG组:密封箱内喂养,EGCG溶液雾化处理、C:对照组:密封箱内喂养,生理盐水雾化处理。  4.维持密封箱氧气浓度70±3%,CO2体积分数<5%,(用钠石灰吸收),温度22-25℃,湿度50%-70%。每天定时开箱1h,添加水、饲料,更换垫料。并对B、C在雾化箱雾化干预。干预方案:B组:5mgEGCG冻干粉溶于4℃生理盐水5ml中,氧气驱动雾化,时间12±0.8min。C组:4℃生理盐水5ml,氧气驱动雾化,时间12±0.8min。  5.观察并记录不同实验组中乳鼠体重的变化。分别于第21天、28天每组随机选取6只小鼠称重后水合氯醛40mg/kg腹腔注射麻醉后,游离气管,切断颈部动静脉放血,取肺组织,冷PBS(PH7.2-7.4)冲洗,滤纸吸干肺组织表面后称重,计算体肺指数。取左肺称重后-80℃冰箱保存,右肺4%多聚甲醛4℃固定。第29天B/C组剩余小鼠转移至空气环境恢复,至第49天同上处理。  6.利用ELISA双抗体夹心法检测肺组织匀浆液中TNF-α、IL-2、MPO表达水平。  7.对不同组实验动物肺组织行病理学检查,用放射状肺泡计数方法及肺泡直径分布评价肺组织发育情况。  【结果】  1.一般情况:空气组自然死亡1只,造模组死亡4只,其中EGCG组1只,对照组3只,死亡时间均在7天内,死亡率比较无统计学意义。  2.第21天正常组IL-2、TNF-α水平低于高氧组,差异有统计学意义,P值分别为P<0.001、P<0.001;MPO水平EGCG组>对照组>正常组,三组间量量比较均具有统计学意义,P值均<0.05;各时间点EGCG组炎症因子水平均低于对照组,然而第21天IL-2第49天TNF-α无统计学差异。  3.随着时间推移,正常组实验动物肺组织匀浆液MPO浓度有所上升。  4.肺组织病理切片结果提示:正常组RAC计数逐步增长,而高氧暴露组(EGCG组和对照组)逐步减少,但EGCG组在停止高氧暴露21天后明显恢复。  5.正常组肺泡直径均匀,EGCG组肺泡直径相对均匀,但分部宽度增大,对照组肺泡大小呈两极分化。  【结论】  1.雾化吸入EGCG可以减轻高氧暴露小鼠肺组织炎症反应程度。  2.雾化吸入EGCG减轻高氧暴露小鼠肺组织病理损伤,并可在实验动物停止高氧暴露后加速肺组织恢复。  3. EGCG有潜力用于预防高氧诱导的支气管肺发育不良,药用价值值得进一步拓展。
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