小鼠室管膜细胞纤毛体外生成系统的构建以及Nek激酶家族成员在纤毛生成过程中的功能研究

来源 :中国科学院上海生命科学研究院生物化学与细胞生物学研究所 中国科学院上海生命科学研究院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:masonchina
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纤毛的摆动是脑脊液流,粘液流产生的动力。纤毛还可以作为细胞的“天线”,来感知外界的信号,比如生长因子,激素等。纤毛产生缺陷会导致很多疾病的发生,包括多囊肾,脑水肿以及视网膜退化等等。最近对纤毛相关疾病的研究兴趣的兴起使得人们开始对构成纤毛的蛋白进行系统的分析。但是,到目前为止,纤毛发生相关的详细机制仍然不是很清楚。   我们分离并鉴定了小鼠脑室下区的神经干细胞和室管膜细胞祖细胞,在体外进行了培养,并通过血清饥饿的方法,诱导这些细胞进一步分化生成多纤毛的室管膜细胞,从而成功建立了室管膜细胞纤毛体外生成系统。然后通过调节细胞密度、包被基质、培养基组成、诱导时间等条件对该系统进行了优化。优化后的系统的第10天的纤毛生成效率可以达到80%左右。在该系统得到进一步优化的基础上,利用该系统,并结合DNA微阵列芯片技术,筛选得到了一系列可能参与室管膜细胞纤毛生成的基因,并对其中的Nek激酶家族进行了进一步的研究。Nek激酶家族中的mNek1,mNek2,mNek3,mNek4,mNek5,mNek8,mNek11在纤毛生成进程中转录水平均出现了不同程度的明显上调。研究表明,在C端带有GFP标签的mNek3,mNek4,mNek5,mNek11外源蛋白在细胞株RPE1和IMCD3中表达均主要定位于细胞质中。在RPE1中过表达这些蛋白的突变体形式,会导致细胞的纤毛生成效率的明显降低。具体的分子机制正在进一步的研究中。
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