【摘 要】
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角质细胞是利用组织工程技术体外构建人工皮肤所必需的种子细胞,但由于其在体外扩增困难且极易分化,因此如何有效提高角质细胞体外扩增能力并抑制其分化一直是皮肤组织工程研
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角质细胞是利用组织工程技术体外构建人工皮肤所必需的种子细胞,但由于其在体外扩增困难且极易分化,因此如何有效提高角质细胞体外扩增能力并抑制其分化一直是皮肤组织工程研究开发中的热点课题.该文以鼠皮肤角质细胞为研究对象,主要考察和分析细胞生长因子KGF和EGF、换液和培养基氨基酸组成对角质细胞体外生长、扩增和分化的影响,在此基础上对传统无血清培养基(MCDB153)进行优化.实验结果表明KGF对促进角质细胞生长和抑制分化具有显著作用,并优于EGF,可望成为角质细胞无血清培养基的一种新的生长因子添加物,其在培养基中的适宜浓度为100ng/ml左右.为消除传统MCDB153培养基培养角质细胞时存在的营养限制现象,一方面考察了换液频率对细胞生长的影响,结果表明每隔24hr换液对细胞生长最为有利,且能获得100％汇合度;另一方面通过对MCDB153培养基的氨基酸组成和浓度进行适当优化,显著提高了细胞生长密度(2倍左右).在此基础上,以MCDB153为基础培养基,添加细胞因子KGF和氨基酸、钙离子、镁离子、巯基乙醇等,最终形成了优化的角质细胞无血清培养基(Optimized MCDB153),实验表明该培养基能显著改善体外培养角质细胞的扩增水平,并在一定程度上抑制细胞分化.
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