论文部分内容阅读
哺乳动物通过有性生殖来繁育后代，正常的配子发生对于哺乳动物的生殖过程来说至关重要。与体细胞不同，生殖细胞通过减数分裂的方式产生配子。因此确保减数分裂过程的正常进行是产生正常配子的前提条件，反之如果减数分裂发生异常将导致非整倍体的产生，从而不能产生配子或者产生异常配子。在小鼠等哺乳动物上，雌性配子的产生过程较为特殊。雌性原始生殖细胞在胚胎期就已经开始减数分裂过程，从而转变为卵母细胞，这些卵母细胞进行到减数第一次分裂前期的双线期就发生阻滞，该阻滞状态会一直持续到出生以后。因此接下来由原始生殖细胞转变成的每一个原始卵泡中都包含有一个阻滞在减数第一次分裂前期的卵母细胞，但是只有具有发育潜能的原始卵泡才可以进一步生长发育为初级卵泡，进而发育为次级卵泡。卵母细胞减数分裂的阻滞主要是由于低水平的成熟促进因子所导致的，成熟促进因子在卵母细胞减数分裂的恢复和进行过程中发挥着主导性的调控作用。周期蛋白B作为成熟促进因子的调节亚基，其规律性的合成和降解调控着成熟促进因子的活性，从而推动和调控了卵母细胞减数分裂的进行。因此对周期蛋白B在卵母细胞减数分裂中的功能研究有着重要意义，不但可以使更好地认识减数分裂过程，也可以为寻找配子发生异常的原因提供重要线索。在本研究中，使用位点特异性重组酶系统成功构建了针对周期蛋白B1的条件性敲除小鼠，克服了周期蛋白B1全身性敲除小鼠胚胎致死的缺点，并采用体外核糖核酸干扰的方法对卵母细胞中的周期蛋白B2进行敲降，深入研究了两种B型周期蛋白在减数分裂过程中的功能。研究结果显示，在卵母细胞中特异性敲除周期蛋白B1之后可导致雌性小鼠不育，这是因为缺失周期蛋白B1的卵母细胞在排放出第一极体之后进入了减数分裂的间期并发生阻滞，因此周期蛋白B1对于卵母细胞减数第二次分裂的进入是必须的;但是缺失周期蛋白B1的卵母细胞可以正常恢复减数分裂，并能够完成减数第一次分裂过程，说明其对于减数第一次分裂的进行来说是非必须的。在缺失周期蛋白B1的卵母细胞中对周期蛋白B2敲降之后发现大部分卵母细胞被阻滞在生发泡时期，说明同时缺失周期蛋白B1和B2的卵母细胞无法正常恢复减数分裂过程。因此，对减数第一次分裂来说，周期蛋白B1和B2都可以激活成熟促进因子，从而推动减数分裂的恢复，并且两者之间存在代偿互补机制;对于减数第二次分裂来说，周期蛋白B1对于成熟促进因子的再激活是必须的，这是卵母细胞进入减数第二次分裂的必要条件。