【摘 要】
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该研究拟用人类来源的人胚肝细胞(L-02)为靶细胞,进行体外实验,从氧化应激、DNA损伤和p53的表达水平三个方面来阐明氟致细胞凋亡的作用机制,为深入研究氟毒作用机制提供理论
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该研究拟用人类来源的人胚肝细胞(L-02)为靶细胞,进行体外实验,从氧化应激、DNA损伤和p53的表达水平三个方面来阐明氟致细胞凋亡的作用机制,为深入研究氟毒作用机制提供理论依据.体外培养的人胚肝细胞接触40、80、160 μg/ml氟化钠24h后,分别采用MTT试验和流式细胞术检测L-02细胞存活率、细胞凋亡百分率和细胞周期构成比;用全自动生化分析仪检测细胞培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)的活性;用TBA法测细胞培养液和细胞裂解液中LPO水平;用Beutler改良法测细胞裂解液中GSH含量;用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)检测DNA损伤;运用western blot和RT-PCR技术分别检测p53蛋白水平和p53转录水平.该实验结果表明:氟可抑制L-02细胞增殖,导致细胞膜结构的损伤;氟可致L-02细胞出现氧化应激和DNA损伤,增加p53转录活性和诱导p53基因表达,并且氟浓度与氧化应激、DNA损伤和p53蛋白水平之间均存在一定的剂量-效应关系;氟还可诱导L-02细胞凋亡,使S期细胞数增多.该实验结果还表明:氧化应激水平、DNA损伤率和p53蛋白水平三者均与细胞凋亡百分率呈明显的正相关关系,提示氧化应激、DNA损伤和p53在氟致细胞凋亡过程中具有重要作用.
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