【摘 要】
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鸡CD3分子是T细胞表面的重要标志之一,在抗原识别过程中,CD3分子参与信号传导。针对鸡CD3分子的特异性单克隆抗体(McAb)可用于测定或分选鸡体内CD3~+ T细胞群,从而了解鸡体的
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鸡CD3分子是T细胞表面的重要标志之一,在抗原识别过程中,CD3分子参与信号传导。针对鸡CD3分子的特异性单克隆抗体(McAb)可用于测定或分选鸡体内CD3~+ T细胞群,从而了解鸡体的细胞免疫功能状态,进行细胞免疫机理的深入研究。鸡白细胞介素2(chicken interleukin-2,ChIL-2)是主要由激活的T细胞和部分B细胞产生的一种糖蛋白,可激活T淋巴细胞,促进B细胞增殖和分泌抗体,增强NK细胞的活性等,是一种天然的免疫增强剂。针对鸡IL-2的特异性McAb可用于建立简单、快速、敏感性高的鸡IL-2检测方法,同时为IL-2在禽类免疫系统中的免疫生物学研究提供有用的工具。本研究分别用表达鸡CD3和IL-2分子的重组真核表达质粒免疫6周龄BALB/c小鼠,制备出能稳定分泌抗鸡CD3和IL-2分子的特异性McAb细胞株,并对McAb的部分生物学特性进行鉴定,为其进一步应用奠定基础。一、重组质粒pcDNA3.1-IL-2的构建及表达通过PCR扩增出鸡IL-2 cDNA片段,并将其克隆入真核表达载体pcDNA3.1(+)中,构建重组真核表达质粒pcDNA3.1-IL-2,经酶切鉴定正确后转染COS-7细胞,间接免疫荧光结果显示,鸡IL-2能在真核细胞中获得表达。将重组原核表达质粒pET-IL-2转化宿主菌BL21(DE3),重组菌小量提取质粒后经酶切鉴定正确;将重组菌用IPTG(0.1mM终浓度)诱导4h后,收获细菌,SDS-PAGE结果表明目的蛋白成功表达;诱导菌经超声波裂解后,分别取沉淀和上清进行SDS-PAGE,结果显示,目的蛋白主要以包涵体形式存在;包涵体经PBS洗涤3次后得到初步纯化,将其溶于6M盐酸胍溶液。二、鸡IL-2 McAb的研制与鉴定
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