【摘 要】
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目的:热休克蛋白70肽段P111-125(ITDAVITTPAYFNDA)是其主要保守性序列之一,此前研究已证实单独使用该肽段免疫大鼠对CIA具有较好的保护作用。本实验拟通过研究HSP70肽段对CIA
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目的:热休克蛋白70肽段P111-125(ITDAVITTPAYFNDA)是其主要保守性序列之一,此前研究已证实单独使用该肽段免疫大鼠对CIA具有较好的保护作用。本实验拟通过研究HSP70肽段对CIA小鼠Th17细胞的影响,探讨其抑制CIA小鼠炎症损伤的机制。
方法:将DBA/1小鼠随机分为HSP70肽段实验组、阴性对照组、PPD对照组、阳性对照组。除阴性对照组外,其它各组小鼠用牛Ⅱ型胶原蛋白诱导关节炎。小鼠于造模前2周开始给药,腹部皮下给予HSP70肽段和结核杆菌(PPD),阴性对照组和阳性对照组注射等量生理盐水。胶原诱导后21d,隔天进行关节炎指数评分和肿胀度测定,并记录发病情况。发病高峰期取小鼠腹股沟及胭窝淋巴结,研磨成细胞悬液,通过流式细胞仪检测Th17细胞数量。使用TRIzol试剂提取淋巴细胞中的总RNA,通过实时定量PCR仪检测Th17细胞相关细胞因子IL-6、TGF-β1、IL-23及转录因子RORγt的mRNA表达情况。发病后4周处死小鼠,取双后足跖趾关节制成石蜡切片,HE染色后进行病理学评分,免疫组化方法检测IL-17的水平。
结果:与阳性对照组和PPD对照组小鼠相比,HSP70实验组小鼠发病延迟:反映疾病严重程度的关节评分低于PPD对照组和阳性对照组,差异有统计学意义(p<0.05)。HSP70肽段实验组CIA小鼠的Th17细胞数量明显低于阳性对照组(p<0.05)。HSP70实验组中,介导CD4+T细胞分化为Th17细胞的重要细胞因子TGF-β和IL-6的表达水平显著降低,与PPD对照组和阳性对照组相比,差异有统计学意义(p<0.05);Th17增殖过程中重要的核转录因子RORγt的表达水平也有明显降低,与PPD对照组和阳性对照组相比,差异有统计学意义(p<0.05);Th17在介导炎症过程中分泌重要的炎性致病因子IL-23的水平低于PPD对照组和阳性对照组,差异有统计学意义(p<0.05)。
结论:HSP70肽段可通过抑制Th17细胞分化的细胞因子及转录因子的表达,延缓Th17细胞的增殖与功能成熟,从而减轻由Th17介导的CIA小鼠的炎性病变。
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