论文部分内容阅读
目的： 本研究采用皮层注射氯化亚铁建立外伤性癫痫大鼠模型，从基因等层面上对比高压氧（Hyperbaric Oxygen，HBO）与一线抗癫痫药物丙戊酸钠（Valproate acid，VPA）对外伤性癫痫（Posttraumatic epilepsy，PTE）的防治作用，并探究其部分治疗机制。 方法： 1、健康成年雄性 SD大鼠16只，通过皮层注射氯化亚铁法造模，采用随机数表法将存活者分为3组：动物模型组、丙戊酸钠治疗组(VPA治疗组)、高压氧治疗组（HBOT组）。对所有动物模型进行常规治疗，丙戊酸钠治疗组予鼻饲丙戊酸钠，高压氧治疗组予高压氧治疗。观察其行为学与脑电图改变。 2、30d后处死动物，在冰上断头取脑，采用 HE染色法观察大脑右侧海马神经细胞损伤情况；运用r-t PCR法检测各样本早期快反应基因c-fos mRNA、c-jun mRNA、c-myc mRNA的表达水平。 3、用SPSS19.0软件进行统计学分析。若方差齐，则采用单因素方差分析，组间均数比较采用 LSD检验；若方差不齐，则采用非参数检验的Kruscal-Wallis法，设定 P＜0.05为差异有统计学意义。 结果： 1、造模情况：造模16只，成功16只，成功率100％。 2、行为学表现：动物模型组动物出现癫痫典型的急性期，静止期及发作期表现；VPA治疗组的癫痫发作频率及持续时间较动物模型组无明显减少；HBOT组的发作频率及持续时间较动物模型组明显减少。 3、脑电图表现：动物模型组大鼠表现出多种形式的癫痫样放电波。VPA治疗组大鼠癫痫发作次数无明显减少。而HBOT组癫痫样放电频率减慢和波幅降低，发作次数明显减少。 4、病理学表现：动物模型组海马神经元缺失明显，出现典型细胞过度凋亡坏死及胶质细胞增生；VPA治疗组海马神经元缺失明显，神经元变性、死亡程度较重；HBOT组神经元变性、死亡程度较轻。 5、PCR结果： 5.1、各组c-fos mRNA的表达水平：VPA治疗组c-fos mRNA的表达水平较模型组显著升高，差异有统计学意义（LSD检验，P＜0.01），HBOT组c-fos mRNA的表达水平较VPA治疗组明显下降，差异有统计学意义（LSD检验，P＜0.05）。 5.2、各组c-jun mRNA的表达水平：HBOT组c-jun mRNA的表达水平较动物模型组及VPA治疗组均明显下降，差异有统计学意义（K-W检验，P＜0.05）。 5.3、各组c-myc mRNA的表达水平：HBOT组及VPA治疗组c-myc mRNA的表达水平较动物模型组显著下降（LSD检验，P＜0.01）。 结论： 1、从行为学、EEG及病理层面表现显示HBOT对PTE动物模型治疗作用较抗痫药佳。 2、从基因层面我们可得出如下推断： 2.1、 c-fos基因作用层面分析：HBOT可能通过降低TBI后脑皮质的高兴奋性，抑制 N-甲基-D-天门冬氨酸（NMDA）受体激活及钙离子内流，使得神经细胞c-fos表达下调，从而抑制外伤性癫痫发作。而VPA作用机制则与之相反，故推断其无法从本机制获益。 2.2、 c-jun基因作用层面分析：HBOT可通过抑制JNK信号通路的激活，抑制神经元过度凋亡及神经胶质细胞病理性增殖，从而达到抗PTE的效果。而VPA无法抑制JNK信号通路的激活。 2.3、 c-myc基因作用层面分析：我们推测HBOT及VPA均可下调c-myc的表达，从而抑制局部神经细胞的过度凋亡，最终抑制PTE发作。 3、HBOT通过降低TBI后脑皮质的高兴奋性及抑制JNK信号通路的激活,以达到抗PTE的效果；而抗痫代表药VPA无法通过上述二机制作用而作用欠佳。