【摘 要】
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为获得叶片组织特异性表达强启动子,该实验克隆改造得到四个玉米rbcS基因启动子突变体.在启动子的GC富含区-118定点突变得到T→C的突变体并将其替换pBI121质粒上的35S启动子
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为获得叶片组织特异性表达强启动子,该实验克隆改造得到四个玉米rbcS基因启动子突变体.在启动子的GC富含区-118定点突变得到T→C的突变体并将其替换pBI121质粒上的35S启动子构建成新的载体pB2;在启动子的-31位置插入了一个八核苷酸片段并将其替换pBI121质粒子的35S启动子构建成新的载体pB8;用rbcS的5端470bp片段与35S启动子构建470bp+35S组合启动子结构的载体pB20;用GC富含区-118→C点突变得到的突变体的3端324bp与35S启动子构建324bp+35S双启动子结构载体pB13.另外,还用未经济修饰的rbcS启动子替换了35S启动子构建了载体pB9,作为对照.在烟草原生质体中对改造后的启动子表达强度进行了瞬时表达的检测.测定结果表明pB13的双启动子结构表现出了最大的活性,是rbcS启动子的4倍,是35S启动子的1.4倍.pB20与p2表达强度相关不大,都是rbcS启动子的3倍,是35S启动子的1.2倍.p8没有明显的增强效果,只是rbcS启动子的1.6倍,是35S启动子的0.6倍.启动子突变体转化实验和组织特异性验证等正在进行.
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