论文部分内容阅读
昆虫杆状病毒表达载体系统(BEVS)是当今基因工程领域4大表达系统之一。由于其独特的优越性,BEVS被广泛应用。但是由于杆状病毒基因组很大,难以进行重组操作,从而限制了它的进一步发展。细菌介导的基因转移在哺乳动物细胞和哺乳动物组织内已经被证实,但这种方法是否能够成功的运用与昆虫细胞的尚未报道。
在本实验中,大肠杆菌能够介导egfp基因成功转移到昆虫细胞Spodopterafrugiperda(Sf9)和Bombyx mori(BmN-SWU1)细胞系并表达已经被证实。将带有重组杆状病毒质粒的大肠杆菌与昆虫细胞简单共孵育一定的时间后,就能获得高滴度的带有绿色荧光蛋白基因作为标记的杆状病毒粒子了。用一定的方法计算出昆虫细胞内的大肠杆菌数量以及病毒粒子的滴度,就能够知道由大肠杆菌介导进入昆虫细胞的杆状病毒DNA的数目。我们的结果表明,BmN-SWU1比Sf9细胞对大肠杆菌介导的基因转移更敏感,因此感染的效率更高。令人吃惊的是,和已经发现的细菌介导的基因转移在哺乳动物细胞中不同,pGB2Ωinv-hly质粒对提供昆虫细胞感染效率没有明显的作用。
通过实验证明,大肠杆菌介导的基因转移到昆虫细胞是一种新颖的高效的方法,对利用获得高滴度的杆状病毒和获得高水平表达的外源真核基因是很有价值的。