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第一部分TGF-β1/Notch信号通路在肾小球足细胞损伤中的表达和作用目的通过检测阿霉素致肾小球足细胞损伤前后转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)、podocin、缺刻蛋白1(Notch1)、Jagged1的m RNA及其蛋白表达的变化,探讨TGF-β1/Notch信号通路在肾小球足细胞损伤中的作用。方法体外培养MPC5(mouse podocyte clone 5)肾小球足细胞,随机分为正常组、阿霉素损伤组,正常组足细胞在正常培养基中培养24小时,阿霉素损伤组在含阿霉素0.1μg/ml的培养基培养24小时构建足细胞损伤模型,光镜观察造模前后足细胞形态变化,采用实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-PCR)及免疫印迹(western blot)法检测两组足细胞TGF-β1、podocin、Notch1、Jagged1的m RNA及其蛋白表达水平。结果(1)光镜下正常组足细胞排列规整,大小均一,形态饱满且轮廓清晰,细胞呈梭状或多边形,而阿霉素损伤组足细胞排列紊乱,大小不一,细胞萎缩或者肥大且边界不清晰,可见散在足细胞碎片;(2)与正常组相比,阿霉素损伤组足细胞TGF-β1、Notch1、Jagged1的m RNA及其蛋白表达均显著增高(P均<0.05),而podocin的m RNA及其蛋白表达均显著降低(P均<0.05)。(3)相关性分析:阿霉素损伤组足细胞Notch1、Jagged1的m RNA表达与TGF-β1的m RNA表达均呈显著正相关(r=0.84,r=1,P均<0.05),而Notch1、Jagged1的m RNA表达与podocin的m RNA表达均呈显著负相关(r=-0.95,r=-0.94,P均<0.05)。结论在阿霉素致足细胞损伤中,足细胞的TGF-β1/Notch表达显著增高,TGF-β1/Notch信号通路可能参与了足细胞的损伤。第二部分全反式维甲酸对肾小球足细胞损伤TGF-β1/Notch信号通路的影响目的通过检测全反式维甲酸(all-trans retinoic acid,ATRA)干预前后损伤足细胞TGF-β1、podocin、Notch1、Jagged1的表达变化,探讨ATRA对阿霉素致足细胞损伤中TGF-β1/Notch信号通路的影响。方法体外培养肾小球足细胞,随机分为正常组、模型组、ATRA干预对照组、ATRA干预组。正常组足细胞不做任何处理,正常培养基中培养24小时;模型组足细胞在含阿霉素(0.1μg/ml)的培养基中培养24小时制备足细胞损伤模型;ATRA干预对照组足细胞在含ATRA(0.1μg/ml)的培养基中培养24小时;ATRA干预组足细胞致损伤模型的建立方法同模型组,足细胞损伤后用ATRA(0.1μg/ml)干预24小时。应用倒置显微镜观察各组足细胞形态变化,采用RT-PCR法检测各组足细胞TGF-β1、podocin、Notch1、Jagged1的m RNA表达,采用western blot法测定各组足细胞TGF-β1、podocin、Notch1、Jagged1的蛋白表达。结果(1)在倒置显微镜下观察,正常组与ATRA干预对照组足细胞形态学无显著差别,细胞形态饱满、轮廓清晰,而模型组足细胞突触减少或者消失,细胞萎缩或者肥大,可见大量散在足细胞碎片;ATRA干预组足细胞和正常足细胞相比变化不大。(2)与模型组足细胞比较,ATRA干预组足细胞的TGF-β1、Notch1、Jagged1 m RNA及其蛋白表达均显著降低(P均<0.05),而足细胞podocin的m RNA及其蛋白表达均显著增高(P<0.05);(3)正常组与ATRA干预对照组足细胞的各指标之间均无显著差异(P均>0.05)。结论在阿霉素致足细胞损伤中,ATRA能够显著降低TGF-β1/Notch信号通路的表达、增强podocin的表达,从而减轻足细胞损伤。