【摘 要】
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本研究利用初步改造的hGM-CSF基因构建了PGAPZα-A/hGM-CSF重组分泌型表达载体，将其转入毕赤氏酵母SMD1168菌株和GS115菌株，得到了整合有hGM-CSF基因的工程菌。经SDS-聚丙烯酰
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本研究利用初步改造的hGM-CSF基因构建了PGAPZα-A/hGM-CSF重组分泌型表达载体，将其转入毕赤氏酵母SMD1168菌株和GS115菌株，得到了整合有hGM-CSF基因的工程菌。经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳筛选得到了1号、2号和6号三个表达较好的工程菌，根据SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳测蛋白质相对分子量的方法测得1号、2号和6号电泳样品中主带蛋白质的相对分子量分别为的15.135kD、14.791kD和14.454kD，与文献报道的hGM-CSF的相对分子量（14.4kD）的差在±10％以内，说明主带蛋白质可能是hGM-CSF。利用Folin-酚试剂法测得1号、2号和6号工程菌发酵液上清中的蛋白质总浓度分别为46.5μg/mL、54.7μg/mL和46.5μg/mL，用薄层扫描仪分析染色后的聚丙烯酰胺凝胶得到了1号、2号和6号样品中主带蛋白质在其蛋白质总量中所占的比例，分别为47.002％、45.731％和51.166％，计算得到了1号、2号和6号工程菌中主带蛋白质的表达量分别为1.093μg/mL、1.251μg/mL和1.190μg/mL。TF-1依赖细胞株/MTT比色法检测活性的结果表明1号、2号和6号工程菌分泌表达的蛋白质具有天然hGM-CSF的生物活性，活性单位分别为1.14×10~4U/mL、1.11×10~4U/mL和1.23×10~4U/mL，比活性分别为1.043×10~7U/mg、0.887×10~7U/mg和1.034×10~7U/mg，与文献报道的hGM-CSF的比活性（0.8～1.1×10~7U/mg）相符，初步确定主带蛋白质是hGM-CSF。本研究初步验证了毕赤氏酵母表达hGM-CSF的可行性，在hGM-CSF的商业化生产和临床应用方面具有重要的理论和应用价值。
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