【摘 要】
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通过文献检索获得已发表的Bacillussubtilis的纤维素酶基因序列,然后以此为依据设计引物,以Y106染色体DNA为模板,用PCR技术扩增了编码纤维酶的基因片段.将PCR产物纯化用SalI
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通过文献检索获得已发表的Bacillussubtilis的纤维素酶基因序列,然后以此为依据设计引物,以Y106染色体DNA为模板,用PCR技术扩增了编码纤维酶的基因片段.将PCR产物纯化用SalI和BamHI双酶切,与经过相同酶切处理的pUC19连接.连接产物转化E.coliJM109,在含有氨苄青霉素的麦康凯培养基平板上筛选到阳性转化子,然后通过点种CMC-Na平板验证.通过测序,发现所克隆的基因最和的ORF的长为1500Bp,编码一条具有499个残基的多肽链.将此重组质粒命名为pC66.计算出分子量大允为55,000kD,pI值为8.37,通过ExPASy服务器上的Proscale软件进行疏水结构分析,发现在N-端有一个很强的疏水区域是典型的信号肽序列.通过其他分子生物学软件和生物信息学服务器,对核酸序列及其编码的蛋白质序列进行了初步的序列分析和比较,已报道的纤维素酶基因有10个与该文所克隆的纤维素酶基因相似性在91﹪以上.
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