【摘 要】
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该课题目的在于借助动物实验和体外实验,来评价通过基因工程表达的这种融合蛋白的免疫保护作用.该课题所进行的实验主要有以下几个部分:1.运用PCR技术人工构建T细胞表位基因,
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该课题目的在于借助动物实验和体外实验,来评价通过基因工程表达的这种融合蛋白的免疫保护作用.该课题所进行的实验主要有以下几个部分:1.运用PCR技术人工构建T细胞表位基因,并将PCR产物克隆入PMD17-T质粒中.2.从新鲜的结核杆菌中提取总cDNA,并运用PCR技术扩增HSP65的特异性cDNA片段,将其克隆入PMD18-T质粒中.3.在pET28a(+)质粒中完成HSP65基因和T细胞表位基因的重组,并将其转化入BL21大肠杆菌中.4.在大肠杆菌中按照常规方法完成融合蛋白的表达,Ni<2+>-Saphrose-4金属螯合亲和层析法纯化融合蛋白质(简称HSP65-chlamy或H-chlamy).5.评价保护性免疫的动物实验,分别用HSP65-chlamy、失活的沙眼衣原体原生小体(EB)和PBS分别于0,14,21天免疫C57BL/6小鼠.6.初步探讨HSP65-chlamy对小鼠产生保护性免疫机制的实验.通过该实验的研究,我们认为在HSP65与沙眼衣原体MOMP抗原肽所形成的融合蛋白中,HSP65扮演了分子伴侣和免疫佐剂的作用,有效地加强了沙眼衣原体MOMP抗原肽的免疫原性,而这对于研制沙眼衣原体疫苗来说是犹为重要的.虽然该课题初步探讨了小鼠注射HSP65-chlamy形成保护性免疫可能的机制,但在未来的实验中有必要进一步详细阐明其作为保护性抗原发挥作用的机理所在.如果在沙眼衣原体中发现了更多更好的保护性表位,可以期望这种融合蛋白可能会产生更好的免疫效果.
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