沙蚕质量评价研究

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目的:本文以我国海洋动物沙蚕科中产量最大和用途最广的三个品种双齿围沙蚕Perinereis aibuhitensis(Grube,1878)、日本刺沙蚕Neanthes japonica(Izuka,1912)和疣吻沙蚕Tylorrhynchus heterochaetus(Quatrefages,1865)为研究对象,通过文献研究、品种收集与鉴定、药理活性初步研究和化学成分分析,对其进行系统的生药学及相关质量评价研究。  方法:  (1)查阅大量沙蚕古籍记载和现代国内外文献资料,分析沙蚕科动物药用相关研究进展与存在的问题。  (2)收集不同产地沙蚕品种,对其进行原动物、干品性状和粉末显微鉴别;通过考察提取和展开条件,建立氨基酸、脂肪酸类成分薄层色谱鉴别方法;以分离多肽、蛋白质类成分具有独特优势的SDS-PAGE凝胶电泳法鉴别沙蚕各品种。  (3)以纤维蛋白平板法考察沙蚕纤溶活性;采用脾虚小鼠模型开展其改善脾虚症状的药理活性研究。  (4)采用柱前衍生化RP-HPLC法测定沙蚕氨基酸种类和含量,并进行系统的方法学考察和验证。以石油醚提取脂肪酸,后采用氢氧化钾-甲醇溶液甲酯化脂肪酸, GC-MS/MS法分析沙蚕三个品种的脂肪酸成分,通过与NIST库检索匹配,对各成分定性,并计算出相对含量。对含量较高且在预防和改善心脑血管疾病方面具有显著活性的五种不饱和脂肪酸(全顺式-5,8,11,14,17-二十碳五烯酸、全顺式-4,7,10,13,16,19-二十二碳六烯酸、全顺式-5,8,11,14-二十碳四烯酸、全顺式-9、12、15-十八碳三烯酸、顺,顺-9,12-十八碳二烯酸)进行气相色谱法定量。按药典方法,对沙蚕各样品进行水分和灰分测定。  结果:  (1)通过文献研究,系统地查清和总结了沙蚕药用基原、品种分类、古今用途、民间药用和国内外在化学成分、药效和质量控制上的研究进展与存在的问题,具有重要的参考价值。  (2)收集到19个不同产地的沙蚕鲜品和干品。经鉴定,头部的吻是三种沙蚕原动物重要鉴别区;可从大小、长短、颜色和肉质上区别不同沙蚕干品。沙蚕粉末显微镜下可见具斜纹肌纤维、内外刚毛、表皮细胞和脂肪油滴;三个品种间显微特征无明显区别;内刚毛(足刺)和外刚毛显微特征明显,可实现沙蚕科动物和其他纲目动物的区分。水提取沙蚕氨基酸类成分,以正丁醇-无水乙醇-冰醋酸-水(8∶2∶2∶3)为展开剂,用硅胶G板进行薄层分离,三个品种未见明显区分特征;甲醇超声提取沙蚕脂肪酸类成分,以甲苯-乙酸乙酯-甲酸(20∶10∶1)为展开剂,硅胶G薄层展开,紫外灯下(366nm)检视,沙蚕和非沙蚕科动物(水蛭、地龙、土鳖虫和全蝎)、沙蚕不同品种(双齿围沙蚕、日本刺沙蚕和疣吻沙蚕)之间斑点区别明显。SDS-PAGE凝胶电泳法可实现沙蚕和非沙蚕科动物、沙蚕不同品种和同品种不同产地间的区别。  (3)沙蚕粗提液具有体外溶解纤维蛋白的作用,但各产地效价相差较大;沙蚕匀浆液在一定程度上可改善小鼠脾虚症状,提高其免疫力。  (4)柱前衍生化RP-HPLC法同时测定了沙蚕中15种氨基酸含量,包含了除色氨酸外的人类7种必需氨基酸,其中脯氨酸含量最高。GC-MS/MS法检测出三种沙蚕平均含有27种脂肪酸成分,总脂肪酸平均相对含量为89.64%,其中十六烷酸(棕榈酸)相对含量最高。气相色谱法同时测定沙蚕中五种不饱和脂肪酸含量,方法分离度高、定量准确,各沙蚕干品的此五种脂肪酸总量(以生药含量计),范围为2.07~25.45mg/g。各沙蚕干品所含水分、灰分相差较大,水分范围为5.38~13.08%,灰分范围是14.44%~27.48%。  结论:本文对沙蚕科动物进行了本草考证,总结整理了研究背景资料;收集沙蚕科三个品种共19个,进行了原动物和干品性状鉴别与对比分析、显微鉴别描述,建立了脂肪酸类成分薄层色谱鉴别法,可以实现沙蚕科动物真伪鉴别;SDS-PAGE蛋白质电泳法可实现品种区分。沙蚕匀浆液在一定程度上可改善脾虚小鼠症状;沙蚕粗提液具有体外溶解纤维蛋白的作用。建立了稳定可靠的柱前衍生化RP-HPLC法同时测定15种氨基酸含量和气相色谱法同时测定五种不饱和脂肪酸含量;这些含量高、种类丰富的氨基酸和脂肪酸提示了沙蚕是一种营养价值高的海洋动物,其中高含量的不饱和脂肪酸在一定程度上暗示了沙蚕具有潜在的减少血栓生成等改善心脑血管疾病的药理活性,在开发为医疗保健产品方面具有非常大的潜力。  全文从文献研究、品种鉴定、药效和成分分析方面系统地完成了沙蚕的生药学和质量评价研究,为沙蚕的药用开发利用和质量标准建立奠定了基础。
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