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脑出血(intracerebralhemorrhage，ICH)是发病率、致残率和病死率均较高的一类严重的脑血管病。脑出血后血肿周围神经细胞的凋亡是导致患者神经功能缺损的主要原因之一，P75NTR(p75neurotrophinreceptor)与TrkA(tyrosinekinaseAreceptor)均为神经营养因子受体，两者在神经营养因子介导的神经细胞保护中起拮抗作用。最近BAOG等在脑出血病人脑中发现，P75NTR表达上调，TrkA表达不明显变化，提示两者可能参与脑出血中的继发性细胞凋亡。
大量研究表明干细胞移植可以改善脑出血的神经功能缺损症状。尚无研究报道P75NTR与TrkA在BMSCs改善神经功能缺损中的作用。骨髓间充质干细胞(Bonemarrow-derivedmesenchymalstemcells，BMSCs)可从成体骨髓中获取，无免疫排斥反应可自体移植，不涉及伦理，具有多向分化潜能、多种作用机制，易采集制备及保存，不易恶性转化，具有广阔的临床应用前景。移植的BMSCs可改善神经功能，但是其是否通过调节P75NTR与TrkA的表达起到拮抗血肿周围组织中神经元凋亡发挥作用尚不确定。
本研究采用胶原酶诱导法建立脑出血大鼠模型，立体定向将BMSCs注射入模型大鼠纹状体内，比较假手术组、模型组和BMSCs组神经功能评分，细胞凋亡程度，血肿周围P75NTR、TrkA的蛋白表达，来探讨BMSCs移植是否可通过改变血肿周围P75NTR、TrkA表达起到拮抗细胞凋亡的作用。本研究进一步完善BMSCs治疗脑出血的机制，使BMSCs更好的进入临床应用。
目的:
研究骨髓间充质干细胞移植对大鼠脑出血模型神经功能恢复的影响，探讨BMSCs移植是否可通过改变血肿周围P75NTR、TrkA表达起到拮抗细胞凋亡的作用。
方法:
清洁级的雄性SD大鼠，体重250-300g，60只，随机分入假手术组、模型组及BMSCs组。各组均采用牙科钻进行立体定位穿刺，假手术组不注射胶原酶。立体定位穿刺并向纹状体注入胶原酶制作大鼠ICH模型。全骨髓反复贴壁法分离、纯化BMSCs，再用携带绿色荧光蛋白(Greenfluorescenceprotein，GFP)基因的慢病毒对其进行转染。手术后24h将2×105的转染好的BMSCs悬液立体定位向注射入BMSCs组大鼠血肿周围。
对各组于术后1d、3d、7d、14d各个时间点进行神经功能评分（采用mNSS和MLPT量表），14d处死大鼠后取脑固定、包埋、切片，观察BMSCs迁移及存活情况，免疫组织化学法及免疫蛋白印迹法(Western-blotting)检测血肿周围P75NTR、TrkA的表达情况，DNA断裂原位末端标记(terminaldeoxynucleotidyltransferase-mediateddUTPnickendlabeling，TUNEL)法检测血肿周围组织中细胞的凋亡情况。
结果:
1.原代培养的BMSCs在光镜下呈梭形，第二代后形态均—呈漩涡状。流式细胞术鉴定BMSCs，观察其纯度，CD105、CD44、CD34、CD45的阳性率为98.2％、99％、0％、0.2％。BMSCs转染成后在荧光显微镜下呈绿色漩涡状。血肿周围可见较多带绿色荧光的BMSCs，对侧则很少。
2.造模后大鼠出现明显的神经功能缺损，症状持续3-5天，7d后出现不同程度的恢复。假手术组无明显神经功能障碍。7d、14时BMSCs组的mNSS和MLPT评分比较模型组减少，差异有统计学意义(P＜0.05)。
3.模型组及BMSCs组血肿周围P75NTR的表达在造模术后14d较假手术组增多，BMSCs组P75NTR较模型组明显减少，差异均有统计学意义(P＜0.05)。
4.模型组血肿TrkA的表达与假手术组无明显差异(P=0.117)，BMSCs组TrkA在造模术后14d较模型组和假手术组有明显上升(P＜0.05)。
5.模型组及BMSCs组血肿周围TUNEL阳性细胞数较假手术组升高，BMSCs组较模型组明显减少，差异均有统计学意义(P＜0.05）。P75NTR的表达与TUNEL阳性细胞数呈正相关(r=0.955，P＜0.05)。
结论:
1.立体定位向脑出血模型大鼠注射的骨髓间充质干细胞能存活并能使神经功能障碍得以改善。
2.模型组存在P75NTR表达的升高，TrkA无明显改变，凋亡细胞增多，P75NTR可能介导脑出血血肿周围细胞的凋亡。
3.骨髓间充质干细胞的移植能减少脑出血大鼠血肿周围P75NTR的表达，增加TrkA的表达，从而拮抗血肿周围细胞凋亡，其可能是通过此途径促进神经功能恢复。