小鼠ATP8A2和CDC50A的相互作用及其对于亚细胞定位的影响

• 作 者: 刘娜
• 机 构: 中国科学技术大学
• 出 处: 中国科学技术大学
• 发表日期: 2007年期
• 关键词: 亚细胞 真核生物细胞 磷脂分布 基因组比对

真核生物细胞各种膜结构两侧的磷脂分布是不对称的，这种不对称需要磷脂翻转酶的动态调节。目前认为这些酶可以分为三种，爬行酶，外翻酶和内翻酶，对于它们的研究才刚刚起步。P型ATP酶第四类亚型被认为有潜在的磷脂内翻酶活性，酵母全部五个该家族的蛋白如DRS2p等都陆续被确定了具有磷脂内翻酶的活性，并且还发现该类蛋白对于细胞极性建立和膜泡运输有重要作用。另一类保守的两次跨膜蛋白CDC50家族成员，可以和酵母Drs2p等内翻酶相互作用，并且对于它们各自正确的亚细胞定位是必须的。进一步研究表明，酵母内翻酶需要在CDC50家族蛋白的帮助下，才能参与膜泡形成，蛋白转运等过程。哺乳动物中由基因组比对已发现14个P型ATP酶第四类亚型成员，但目前对于它们的研究仅局限于病理方面。为了能够了解哺乳动物磷脂内翻酶在细胞内活动的分子机制，我们克隆了酵母DRS2p在哺乳动物中的同源物ATP8A2，以及和ATP8A2有可能有相互作用的小鼠CDC50A基因。通过组织RT-PCR和免疫荧光，确定ATP8A2和CDC50A在相同的组织中表达，并且在细胞内共定位。将ATP8A2和CDC50A共转入细胞，它们可以从细胞裂解液中互相免疫共沉淀。共转ATP8A2和CDC50A时它们共定位于内质网和溶酶体。但当单转CDC50A时，仅被检测到内质网定位，无法迁移到溶酶体；同样，当单转ATP8A2时，大部分滞留于内质网，无法迁移到溶酶体。这样，ATP8A2和CDC50A的相互作用对于它们各自从内质网到溶酶体的迁移有重要作用。在克隆ATP8A2时还发现它有两种剪切业型，大量α亚型分布在睾丸中，提示它可能对于精子的发生有一定功能。