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第一章肝癌组织中GABARAPL1基因表达变化的意义初探 肝癌被世界卫生组织界定为十大恶性肿瘤之一。现在我国每年有40-50万人死于原发性肝癌，其死亡率在消化系统肿瘤中列第三位。肝癌因其早期症状隐匿，肿瘤恶性程度高，病情恶化速度快，目前并没有有效治疗肝癌的方法。近年来，越来越多的研究表明，异常自噬与多种疾病和恶性肿瘤密切相关，因此研究自噬相关基因与肿瘤的关系对于全面认识肝癌发生发展的机制以及对于今后肝癌的预防和治疗都有非常重要的意义。 GABARAPL1(GABA(A) receptor-associated protein like1）是我们实验室最先发现并克隆到的一个与自噬相关的基因。对于该基因的研究，至今为止还十分有限，特别是该基因在肝癌发生发展中的作用迄今为止未有报道。因此，探索GABARAPL1在肝癌中的表达变化和生理学功能对于全面认识肝癌发生发展的机制是十分必要的。 我们用实时定量PCR taqman法检测了104对肝癌标本中GABARAPL1mRNA的表达水平，发现GABARAPL1在肝癌组织中显著性下调，并且通过与病理资料的关联性分析发现，GABARAPL1在肝癌组织中的下调表达与肝炎史，乙肝病毒感染和术后生存时间具有相关性;同时，我们利用特异性的抗GABARAPL1的抗体检测肝癌组织样本中GABARAPL1蛋白的表达水平，结果显示GABARAPL1蛋白水平在癌组织中也下调表达。接着我们验证了多种肝癌细胞株均能表达出内源的GABARAPL1蛋白，这为后期实验选定细胞系奠定了基础;为了进一步研究GABARAPL1和肝癌发生发展的关系，我们首先在Hep3B肝癌细胞中构建了过表达GABARAPL1的稳定株，然后同时进行生长曲线测定和克隆形成率实验，结果一致显示超量表达GABARAPL1显著抑制肝癌细胞增殖。 综上所述，我们发现了一个在肝癌组织中显著性下调的基因GABARAPL1，研究揭示了GABARAPL1与肝癌临床病理特征具有相关性，证实了过表达GABARAPL1能抑制肝癌细胞的增殖，并发现GABARAPL1过表达与肝癌预后有关。因此，进一步研究GABARAPL1在肝癌发生发展中的分子机制，对于今后肝癌的预防和治疗提供了新的理论基础。 第二章中国人类功能基因克隆与鉴定研究的文献与专利分析 人类基因组计划于20世纪80年代末启动．与此同时，各国的人类功能基因鉴定和克隆工作也相继开展，中国相关领域的研究人员敏锐地意识到对这一新兴领域的探索必将给生命科学和人类健康带来深远的影响，并于20世纪90年代开始相关工作的研究.为加快中国在该领域的发展步伐，20世纪90年代中期，中国高技术研究发展计划（“863”计划）生物领域专家委员会提出了“两个百分之一”的目标，即测序工作量占人基因组测序总量的百分之一，克隆和鉴定的人类功能基因占人类基因总数的百分之一，近20年来，中国在基因组测序和功能基因组研究领域已取得了长足进步．为人们所熟知的成果就是中国承担的人类基因组计划“百分之一”测序任务的完成，然而，关于中国克隆和鉴定人类功能基因“百分之一”的工作则未见有完整报道，本文利用美国国立生物技术信息中心(NCBI)GenBank数据库、PubMed文献搜索工具和中华人民共和国国家知识产权局专利检索数据库，以中国首先发表文章报道人类新基因的克隆与鉴定及人类基因序列是否获得授权专利为筛选标准进行检索分析，截止2011年6月底，确定的由中国报道的人类功能新基因共589个，并且授权的基因序列专利共159条(http://gene.fudan, sh.cn/introduction/database/chinagene/chinagene, html).本文系统地总结了中国在人类功能基因组学研究上的成果，回答了中国在人类功能基因克隆和鉴定方面“百分之一”的工作是否完成的问题。