宁夏地区人和动物BDV感染的分子生物学研究

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目的检测宁夏地区病毒性脑炎患者外周血单个有核细胞(PBMCs)博尔纳病病毒(Borna Disease Virus, BDV)携带情况,分析该BDV与标准病毒株之间的同源性。探讨BDV感染性疾病与病毒性脑炎之间的关系,同时也为部分病毒性脑炎的病因学诊断及其防治提供实验依据。方法采用荧光定量巢式逆转录酶聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR)检测宁夏地区病毒性脑炎患者及正常人PBMCs有核细胞BDV p24基因片段,并对其中阳性扩增产物进行基因序列测定,然后采用BLAST软件以及DNAsist5.0软件对测序结果进行分析。结果病毒性脑炎组样本BDV p24基因片段FQ-nRT-PCR阳性率为(10.17%)显著高于正常对照组(0%) (P<0.05)。病毒性脑炎患者检出的BDV p24基因片段的核苷酸序列与马的BDV标准病毒株H3915序列同源性为97.67%。与H1766株比较在3个位点出现一致性突变(nt1659 T→C,nt1668 A→G,nt1674 T→C,突变率为3.49%);与strain V株比较在4个位点出现一致性突变(nt1648 C→T, nt1658 G→A,nt1667 A→G,nt1673 T→C,突变率为4.65%),但编码的氨基酸相同。这些结果证实扩增所得目的基因片段确系BDV p24的相应片段。结论宁夏地区病毒性脑炎患者中存在BDV感染,提示部分病毒性脑炎的发生可能与BDV感染有关。且该BDVp24扩增产物核苷酸序列与标准病毒株高度同源性,与马源的strain H3915同源性最高。目的初步了解宁夏地区动物牛和绵羊BDV的隐性感染情况,对检测到的BDVp24基因阳性扩增片段进行核苷酸序列比对,探讨其与国外公认的标准病毒株strian He/80、strain V、strainV/FR、strain H3915和strain H1766的同源性。方法采用Real-time nRT-PCR检测宁夏地区205例健康成年牛和268例健康绵羊PBMCs BDVp24基因片段,并对其中的阳性扩增产物进行基因序列测定,然后应用BLAST软件以及DNAsist 5.0软件对测序结果分析。结果205例牛中3例阳性,268例绵羊中4例阳性,该BDVp24片段的核苷酸序列与标准株strain He/80同源性最高,为100%,与strain H3915同源性为97.67%,与strain H1766同源性为96.51%,与strain V和strainV/FR的同源性一致均为95.35%,但是它们编码的氨基酸相同。结论宁夏地区动物牛和绵羊中存在动物源性BDV的隐性感染,该BDV p24核苷酸序列与strain He/80、strain H3915、strain H1766及strain V和strainV/FR具有高度同源性。
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