西维来司他抑制HMGB1减少锂—匹罗卡品癫痫持续状态大鼠脑神经元损伤的研究

• 作 者: 王林
• 出 处: 宁夏医科大学
• 发表日期: 2015年01期
• 关键词: 癫痫持续状态 中性粒细胞弹性蛋白酶 高迁移率族蛋白B1 血脑屏障 西维来司他

目的 癫痫是神经系统常见病及多发病,流行病学调查结果显示,全球约有5000万癫痫患者,我国约有900万以上的癫痫患者,其中约25%-30%患者病情不能有效控制。目前,虽然癫痫相关基础及临床研究已有很多,但其发生的确切病理生理机制迄今仍是谜团,而临床上癫痫患者的总体疗效不佳。越来越多的研究数据表明多种炎症因子参与了癫痫持续状态的发生和发展过程,控制炎症反应,可以减缓病情,改善病理损伤变化。为了进一步阐明癫痫发生的具体分子机制,明确炎症因子在癫痫发病中的作用,本研究通过分析癫痫模型体内HMGB1(High Mobility Group Box 1)、NE(Neutrophil Elastase)等炎性相关蛋白分子的表达,评价其抑制剂西维来司他和甘草甜素的抗癫痫作用及机制,为寻求新的抗癫痫靶点和更加安全、有效的抗癫痫药物提供有力的科学依据。方法 选取健康成年雄性SD大鼠,随机分为正常对照组、癫痫持续状态组、甘草甜素治疗组和西维来司他治疗组。经腹腔注射LiCl-PILO,建立LiCl-PILO癫痫持续状态大鼠模型,通过Racine分级法筛选发作程度达Ⅳ级以上的大鼠纳入实验组。在西维来司他和甘草甜素干预治疗后3h,6h,12h,24h,48h,72h后,取各组大鼠血清,通过酶联免疫吸附法(ELISA)测定上述各时间点血清中HMGB1、NE和S100β的表达改变;取各组大鼠脑组织,采用尼氏(NISSL’)染色观察大鼠海马区神经元的变化,同时采用免疫组织化学法(IHC)观察HMGB1和NE在海马组织中的分布与表达情况;取各组大鼠双侧海马组织,采用免疫印迹(Western Blot)方法检测HMGB1、NE在海马组织中蛋白水平的表达改变,观察西维来司他和甘草甜素干预治疗对癫痫持续状态急性期大鼠的影响。结果 ELISA、尼氏染色、免疫组化和Western Blot结果显示,与正常对照组相比,癫痫持续状态后大鼠血清中HMGB1、NE、S100β表达水平明显升高(P<0.01),而且随着时间的延长HMGB1在血清中表达水平总体呈上升趋势,24 h达到最大峰值(P<0.001);癫痫持续状态导致大量海马神经元的损伤,致使BBB开放;西维来司他治疗后大鼠血清中HMGB1、NE含量均显著被抑制,S100β表达水平降低(P<0.01),海马神经元损伤明显减轻,且保护了BBB的完整性;甘草甜素治疗组的大鼠海马神经元和BBB损伤明显减轻,血清中HMGB1含量明显降低(P<0.01),但NE的含量未见明显变化(P>0.05)。结论 西维来司他或可作为抗癫痫药物应用,通过抑制LiCl-PILO诱导的癫痫持续状态模型大鼠脑内炎症细胞浸润、抑制NE、HMGB1的表达,阻止大鼠海马区HMGB1的迁移,降低受损脑细胞炎症反应;保护血脑屏障的完整性;减轻海马神经元损伤,减少癫痫持续状态所致的受损神经元的数量而产生抗癫痫作用。