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刚地弓形虫是一种顶复门专性细胞内寄生原虫,是非常重要的人兽共患病原体。弓形虫生活史复杂,宿主范围广泛,能感染包括人在内的几乎所有温血动物。弓形虫一直作为了解宿主免疫系统抵抗细胞内病原体的重要的模式生物。NF-κB信号通路被认为在调节对抗弓形虫的宿主初级和获得性免疫反应中有着重要的地位。近年来,一系列弓形虫抗原被发现能够调控宿主NF-κB信号通路,但它们的具体机制尚不明确。本研究首先检测5株不同弓形虫速殖子对宿主NF-κB信号通路的影响;然后利用双荧光素酶报告系统检测了22种弓形虫抗原对NF-κB信号通路的激活效应,发现GRA15能激活NF-κB信号通路,进而对其激活通路的具体分子机制进行了探索。1)不同株弓形虫速殖子对NF-κB信号通路的影响将RH、Me49、VEG、地方Ⅰ型和地方Ⅱ型弓形虫速殖子感染HEK293T细胞,利用双荧光素酶报告系统检测它们不同感染丰度下对NF-κB信号通路的影响,发现Me49、VEG、地方Ⅰ型和地方Ⅱ型弓形虫能激活NF-κB信号通路,RH株弓形虫对NF-κB信号通路有非常明显的抑制效应。利用间接免疫荧光试验评估5种弓形虫速殖子入侵细胞的能力,选取有相似入侵量时的感染丰度进行比较,发现这些弓形虫速殖子对NF-κB信号通路的影响存在差异。2)激活NF-κB信号通路的弓形虫抗原的筛选将22种弓形虫抗原真核表达质粒分别转染HEK293T细胞,利用双荧光素酶系统检测发现仅有pCMV-GRA15(Ⅱ)和pCMV-GRA15(Ⅰ)能够激活NF-κB信号通路。利用Western blot和IFA分析表达了Ⅰ型GRA15蛋白的宿主细胞,发现细胞内p65磷酸化水平显著提高,并发生核转移现象,验证了Ⅰ型GRA15能够激活NF-κB信号通路。3)GRA15激活NF-κB信号通路的分子机制根据生物信息学分析,全长的GRA15存在着两种结构域,跨膜区和核定位信号。因此构建了7个不同长度的GRA15截短真核表达质粒(pCMV-GRA15-1、pCMV-GRA15-2、pCMV-GRA15-3、pCMV-GRA15-4、pCMV-GRA15-5、pCMV-GRA15-6和pCMV-GRA15-7),将它们分别转染HEK293T细胞,利用双荧光素酶报告系统检测到pCMV-GRA15-4、pCMV-GRA15-5、pCMV-GRA15-6和pCMV-GRA15-7均有激活NF-κB信号通路的作用,推测Ⅰ型GRA15的194-518氨基酸区域为激活NF-κB信号通路的结构域。最后利用Western blot检测GRA15表达的细胞胞浆中IκB和磷酸化的IκB的总量,发现GRA15能使得胞浆中IκB的表达量显著减少,但P-IκB的量也显著减少。结果表明GRA15可能是通过降解IκB来激活NF-κB信号通路。本研究利用多种技术对弓形虫如何调控宿主NF-κB信号通路进行了探索,不仅加深了对弓形虫与宿主免疫机制的相互作用的理解,更为弓形虫新型药物和疫苗的开发提供了理论基础。