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实验目的 通过观察水蛭素对体外培养的巩膜成纤维细胞及细胞外基质的影响，从而探讨水蛭素防治由成纤维细胞增生引起的疾病的机制。 实验方法 日本大耳白兔，取其巩膜组织剪成1mm×1mm碎块放人50ml培养瓶，加入含15％胎牛血清5ml培养，长满瓶壁后用0.25％胰蛋白酶消化传代，取其第三代细胞作实验用，调整细胞密度为5×104个／ml，按每孔0.2ml接种于96孔培养板，37℃、5％CO2培养箱中培养24小时，无血清培养液洗涤三次，随机分组进行实验，加含50单位／ml、40单位／ml、20单位／ml、10单位／ml、1单位／ml水蛭素培养液200μ1，每7孔为一浓度组，无药培养液为对照组，共6组，培养箱中培养48小时后用噻唑蓝（MTT）法测定各孔贴壁细胞数量的吸光度（A）值，同时取其上清液，用放射免疫法测其HA、Ⅲ型胶原的浓度。 实验结果 1．MTT法显示：水蛭素10单位／ml组A值与对照组相比有极显著差异（p＜0.01），其增生抑制率最高。其余几组A值与对照组相比虽无统计学意义（P＞0.05），但仍可见到降低趋势。 2．水蛭素10单位／ml组HA的浓度明显低于对照组，有极显著性差异（P＜0.01）；其余几组中HA的浓度与对照组相比有显著差异（P＜0.05）。 3．水蛭素10单位／ml组Ⅲ型胶原的浓度明显低于对照组，有极显著成都中医药大学硕士学位论文水蛙素对体外培养的成纤维生长的影响性差异（P<0 .01）;其余几组111型胶原的浓度与对照组相比有显著性差异（P<0 .05）。实验结论 水蛙素在体外能直接抑制FB增生及HA、111型胶原合成、分泌，推测其机制可能为:1.抑制PDGF合成及分泌，以及通过抑制PDGF对PDGF一R的作用，阻碍DNA的合成，阻止细胞分裂增殖，从而间接抑制HA、m型胶原的生成;同时通过抑制FB的活性，直接抑制FB合成及分泌HA、111型胶原。2.此外水蛙素通过抑制ECM，从而阻碍ECM一FB的相互作用，抑制ECM对FB的增生及趋化作用。