【摘 要】
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本实验通过对秋水仙碱与银杏小孢子叶球全蛋白的光谱影响研究,初步探索秋水仙碱与银杏小孢子叶球蛋白的作用；有机溶剂萃取法分离游离的秋水仙碱,高效液相色谱法测定游离的秋水
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本实验通过对秋水仙碱与银杏小孢子叶球全蛋白的光谱影响研究,初步探索秋水仙碱与银杏小孢子叶球蛋白的作用；有机溶剂萃取法分离游离的秋水仙碱,高效液相色谱法测定游离的秋水仙碱,确定银杏不同组织蛋白与秋水仙碱的结合力；应用蛋白质组学方法,在蛋白质水平上分析秋水仙碱处理前后的差异,从生理生化和分子水平上揭示秋水仙碱诱导银杏染色体加倍的特异性,探讨银杏小孢子加倍的机理。实验结果如下：银杏小孢子叶球蛋白280nm附近的吸收峰随秋水仙碱浓度的增加而迅速增大并发生一定程度的蓝移,处理时间对此作用体系几乎没有影响；278nm与295nm光激发时,秋水仙碱处理后均引起银杏小孢子叶球蛋白的内源荧光降低,荧光发射峰的位置均发生了一定程度的蓝移,秋水仙碱处理银杏小孢子叶球蛋白,随着温度的升高,荧光强度增强。高效液相色谱法确定了银杏组织蛋白与秋水仙碱的结合力,银杏小孢子叶球蛋白与秋水仙碱结合力活性最强,为7.977ng.mg-1.ml-1,其次是银杏胚蛋白,为2.701ng.mg-1.ml-1,银杏叶蛋白最弱,为2.519ng.mg-1.ml-1。优化了银杏小孢子叶球蛋白双向电泳技术,TCA／丙酮法提取银杏小孢子叶球总蛋白方法优于其它方法,17cm胶条蛋白溶解液上样量均为1500ug进行双向电泳时图谱质量最佳。实验对秋水仙碱处理前后的银杏小孢子叶球全蛋白进行了2-DE电泳,通过比较,发现6个差异蛋白点,其中秋水仙碱处理2天后新出现2个蛋白点,消失1个蛋白点,表达上调1个蛋白点,下调2个蛋白点。
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