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目的:拓扑替康静脉化疗在治疗复发性卵巢癌中疗效不亚于紫杉醇,甚至可获得较紫杉醇更高的缓解率和更长的稳定期,且对耐铂类或耐紫杉醇类的卵巢癌也有效,但严重的血液学毒性反应限制了其应用?本文旨在通过体内实验探讨拓扑替康腹腔化疗治疗浆液性卵巢癌的疗效和可行性;并就拓扑替康抑制卵巢癌血管生成作用机制进行探讨? 第一部分:拓扑替康腹腔化疗对人卵巢癌裸小鼠移植瘤作用的实验研究 一?拓扑替康腹腔化疗对人卵巢癌裸小鼠网膜移植瘤的作用 方法:80 只 6～8 周龄雌性 BALB/c(nu/nu)裸小鼠用于构建人卵巢癌SKOV3ipl 裸小鼠网膜移植瘤模型,1 周后随机分为 8 组(n=10)?实验组(组 1-组 6)分别腹腔注射不同剂量拓扑替康(1.5mg/kg×2 次, 3.0mg/kg×2 次, 6.0mg/kg×2 次或 10.0mg/kg×1 次),或静脉注射拓扑替康(6.0mg/kg×2 次或10.0mg/kg×1 次);对照组(组 7-组 8)分别腹腔注射顺铂(7.5 mg/kg)或等体积生理盐水?给药第 3 周牺牲裸小鼠,计算实验各组的抑瘤率,并与顺铂治疗组对比?用流式细胞仪评价用药后细胞周期和凋亡的改变? 结果:拓扑替康治疗人卵巢癌裸小鼠网膜移植瘤疗效优于顺铂,且呈剂量与途径依赖性,其中腹腔化疗优于静脉化疗(P<0.05),而腹腔单次大剂量拓扑替康(10.0 mg/kg)冲击治疗效果最佳,抑瘤率达 70.4%,明显优于其他各组(P<0.05),且裸小鼠耐受性好?拓扑替康作用于 SKOV3ipl 细胞周期的各个时相,与给药浓度相关?拓扑替康诱导细胞凋亡,且凋亡的抑制程度与拓扑替康疗效呈正相关性? 二?拓扑替康腹腔化疗对人卵巢癌裸小鼠原位移植瘤的作用 方法:98 只 6～8 周龄雌性 BALB/c(nu/nu)裸小鼠用于构建人卵巢癌SKOV3ipl 裸小鼠原位移植瘤模型,1 周后随机分为 6 组,实验组分别腹腔注射拓扑替康(5.0mg/kg×2 或 10.0mg/kg×1,n=14),或静脉注射拓扑替康(5.0mg/kg×2 或 10.0mg/kg×1, n=14);对照组分别腹腔注射顺铂(7.5 1<WP=5>拓扑替康腹腔化疗治疗浆液性卵巢癌的实验研究 复旦大学博士论文 中文摘要mg/kg,n=14)或等体积生理盐水(n=28)?给药第 3 周各组随机取半数裸小鼠计算抑瘤率和转移灶数目;对各组其余半数裸小鼠评价生存情况? 结果:拓扑替康腹腔化疗疗效优于静脉化疗,以腹腔单次大剂量拓扑替康(10.0 mg/kg)冲击治疗效果最佳,抑瘤率 66.2%,转移灶数目明显减少,裸小鼠平均生存期延长(64 天)(P<0.05),且裸小鼠耐受性好? 第二部分:拓扑替康腹腔化疗抑制人卵巢癌裸小鼠移植瘤血管生成的实验研究 方法:28 只 6～8 周龄雌性 BALB/c(nu/nu)裸小鼠用于构建人浆液性卵巢癌 SKOV3ipl 裸小鼠原位移植瘤模型,1 周后随机分为 4 组(n=7);治疗组 1予拓扑替康 5.0mg/kg 腹腔化疗 2 次;治疗组 2 予拓扑替康 10.0mg/kg 腹腔化疗 1 次,分别与生理盐水对照;计算两种方案拓扑替康腹腔化疗的抑瘤率,用免疫组化标记移植瘤微血管,用 RT-PCR 和 Western blot 方法检测血管生成相关基因 VEGF?bFGF 及 Ets-1 表达水平?用 SPSS10.0 软件进行统计分析,P<0.05提示差别有统计学意义? 结果:治疗组 1 和治疗组 2 的抑瘤率分别为 40.6%和 67.8%(P=0.00);经拓扑替康治疗后移植瘤微血管计数(MVC)明显下降,其中治疗组 2 的 MVC4.7±1.1 较治疗组 1 的(9.3±1.1)明显减少(P=0.03);治疗组 2 引起 VEGF?bFGF及 Ets-1 的 mRNA 表达水平分别降低 55.2%?76.4%及 51.9%,蛋白水平分别降低54.7%?77.8%及 52.1%,明显低于治疗组 1 引起的下降幅度(P=0.01)? 结论: 1.拓扑替康腹腔化疗治疗人浆液性卵巢癌体内实验疗效优于同等剂量下的静脉化疗,且安全可行,为其临床应用打下了基础? 2.拓扑替康腹腔化疗可抑制卵巢癌血管生成,且呈剂量依赖效应,其潜在机制可能是通过 Ets-1 对 VEGF 和 bFGF 的调控来实现的?