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目的：类风湿关节炎(Rheumatoid arthritis, RA)是由免疫活性细胞和多种细胞因子介导的慢性全身性自身免疫性疾病。近年来间充质干细胞(mesenchymal stem cells, MSCs)的免疫调节作用在自身免疫病中的应用颇受关注。人羊膜间充质干细胞(human amniotic mesenchymal stem cells, hAMSCs)是否通过免疫调节发挥对RA的治疗作用尚不清楚。本研究以大鼠胶原诱导性关节炎(Collagen-induced arthritis, CIA)为模型,研究hAMSCs移植对CIA的治疗效应及免疫调节作用。方法：①细胞分离及鉴定：采用胰酶-胶原酶两步消化法从足月分娩的人羊膜组织中分离人羊膜间充质干细胞,用流式细胞仪(Flow cytometry, FCM)和免疫细胞化学(Immunocytochemistry, IC)法进行表型鉴定和细胞鉴定。②尾根部皮内多点注射牛Ⅱ型胶原(Collagen Ⅱ,CⅡ)和完全弗氏佐剂(Complete Freund’s Adjuvant, CFA)的混合乳剂诱导Wistar大鼠CIA模型。模型动物48只随机分为四组：模型组(n=12)；培养基对照组(n=12)双侧踝关节腔注射等体积无血清L-DMEM培养基100μl; hAMSCs治疗组经双侧踝关节腔移植(n=12,1×106cells/100μl);氨甲蝶呤(Methotrexate, MTX)治疗组腹腔注射药物(n=12,750ug/kg,每周一次,接连4周)。各组分别于2W和4W各处死6只。末次免疫后双盲法每3天观察大鼠足趾红肿程度并测量足趾肿胀度,持续观察4W。③FCM检测]hAMSCs移植后2W和4W各组外周血单个核细胞中CD4+IFN-y+(Th1)、CD4+IL-4+(Th2)、 CD4-CD8+IFN-y+(CTL1)、CD4-CD8+IL-4+(CTL2)、CD4+Foxp3+(Treg)、CD4+IL-17+(Th17)、 CD3+CD16+CD56+(NKT). CD161+(NK)及CD45RA+(B)亚群百分率的变化。④流式细胞微球芯片捕获(Cytometric Bead Array, CBA)技术检测血浆细胞因子IL-2、IL-4、IL-10、TNF-α和IFN-γ含量。⑤免疫荧光染色检测细胞移植后2W和4W CIA大鼠踝关节供体细胞的存活情况。结果：①FCM和IC分析结果显示hAMSCs高表达CD44、CD29、CD90、CD73、 CD105及波形蛋白阳性,不表达CD34、CD45、CD19、CD14、CD80、CD86和HLA-DR。②与模型组和培养基组比较,hAMSCs治疗组和MTX治疗组治疗后第4d起AI和足趾容积值均明显下降(P<0.05),踝关节X线和病理结果显示关节骨质破坏和炎症反应减轻。③与模型组和培养基组比较,hAMSCs治疗组Th1、Th2、 Th17、CTL1、CTL2和NKT亚群百分比明显下降,而Foxp3+Treg细胞显著上调(P<0.01)。hAMSCs治疗组和MTX治疗组淋巴细胞亚群的变化相似,但后者Foxp3+Treg细胞上调幅度不及前者(P<0.01)。④与模型组比较,hAMSCs组IL-10和IL-4明显升高(P<0.05),IFN-γ和TNF-a含量下降(P<0.05)。⑤免疫荧光染色结果显示,踝关节腔移植后hAMSCs在踝关节组织中存活达到4W以上。结论：hAMSCs能明显改善CIA大鼠临床症状和关节病变,其机制主要与上调Foxp3+Treg和抑制Th17细胞有关,提示]hAMSCs是用于RA细胞治疗理想的候选者。